寧夏地區(qū)牛結(jié)核病的分子流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、目的：分離培養(yǎng)并鑒定牛源分枝桿菌；對分離獲得的結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群菌株進行基因多態(tài)性研究，從分子流行病學(xué)角度分析寧夏地區(qū)牛結(jié)核病流行特點；對非結(jié)核分枝桿菌親緣關(guān)系進行研究，初步了解非結(jié)核分枝桿菌在本地奶牛中的流行情況。
　　 方法：采集牛鼻拭子和牛咽拭子，對其進行處理，以羅氏培養(yǎng)法分離培養(yǎng)臨床牛源分枝桿菌，并應(yīng)用PCR方法做進一步鑒定；采用基于PCR的VNTR分型方法，對結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群臨床分離株進行多態(tài)性研究；采用ERIC方法

2、對非結(jié)核分枝桿菌親緣關(guān)系進行研究。
　　 結(jié)果：
　　 1.對2040份臨床鼻拭子和咽拭子常規(guī)處理后，利用羅氏培養(yǎng)法對牛結(jié)核病病原菌進行分離培養(yǎng)，應(yīng)用PCR方法對形態(tài)學(xué)及涂片染色呈陽性的細菌進行鑒定。共獲得結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群菌株(MTC)27株，非結(jié)核分枝桿菌34株。27株MTC中，25株為寧夏分離株(14株為牛分枝桿菌，11株為結(jié)核分枝桿菌)，2株是新疆分離株(2株均為牛分枝桿菌)。
　　 2.采用VNTR基因

3、分型方法，對7株東北地區(qū)臨床株、本實驗室分離培養(yǎng)的25株寧夏地區(qū)臨床株和2株新疆地區(qū)臨床株進行基因多態(tài)性研究。在相似系數(shù)90％的水平上，得到26個基因型，其中包含8個簇(每2株一簇)和18個獨特基因型。相似系數(shù)80％的水平上形成10個簇，3個獨特基因型，最大一簇包含7株菌。
　　 3.基因分型結(jié)果表明，存在養(yǎng)殖場的奶牛結(jié)核病流行情況，但沒有場爆發(fā)性流行情況。寧夏地區(qū)分離的11株結(jié)核分枝桿菌中，1株為北京基因型；6株東北地區(qū)結(jié)核分

4、枝桿菌中，3株為北京基因型。以上數(shù)據(jù)表明，寧夏和東北地區(qū)均存在北京基因型菌株的感染情況。由于尚未有關(guān)于牛源北京基因型菌株的報道，因此認為本實驗中所研究的4株北京基因型株可能是由人傳染給牛。某些不同養(yǎng)殖場的菌株間相似系數(shù)達到了90％以上，可能這些場間存在奶牛相互引進時造成結(jié)核病的傳染。在相似系數(shù)80％的水平上，最大1簇包含的7株牛分枝桿菌，來自6個養(yǎng)殖場，因此認為該基因型牛分枝桿菌菌株可能是寧夏牛分枝桿菌流行株；國內(nèi)外數(shù)據(jù)比對結(jié)果顯示，寧