珊瑚轉(zhuǎn)化型羥基磷灰石(天博)與純相β-磷酸三鈣(Cerasorb)對成骨細胞增殖活性的影響.pdf

1、目的:
　　 通過培養(yǎng)St2細胞,擴增,經(jīng)礦化誘導(dǎo),向成骨細胞(Obs)分化,并對礦化誘導(dǎo)后的細胞進行成骨細胞鑒定,然后將成骨細胞擴增培養(yǎng);將成骨細胞與珊瑚轉(zhuǎn)化型羥磷灰石(天博骨粉,CHA)、純相β-磷酸三鈣(Corasorb,β-TCP)進行體外復(fù)合培養(yǎng),觀察研究CHA、β-TCP對成骨細胞增殖活性的影響。從細胞水平評價CHA、β-TCP兩種生物支架材料的生物相容性及對成骨細胞增殖能力,進而為組織工程人工骨支架材料的選擇應(yīng)用提

2、供基礎(chǔ)實驗依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.St2細胞的培養(yǎng)及傳代:
　　 用培養(yǎng)St2細胞株,獲得穩(wěn)定良好的實驗細胞,應(yīng)用完全DMEM低糖培養(yǎng)基對St2細胞進行傳代擴增培養(yǎng),并進行凍存作為庫存細胞。
　　 2.St2細胞向成骨細胞分化、鑒定和培養(yǎng):
　　 將生長良好的St2細胞在成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)液內(nèi)常規(guī)培養(yǎng),使St2細胞向成骨細胞分化,然后對誘導(dǎo)后的細胞采用Gomori鈣鈷法,堿性磷酸酶(ALP)染色

3、,茜素紅礦化結(jié)節(jié)染色,進行成骨細胞的鑒定獲得成骨細胞,進行擴增培養(yǎng)。
　　 3.分組將成骨細胞接種在CHA、β-TCP支架材料上進行培養(yǎng)。
　　 采用體外復(fù)合細胞培養(yǎng),觀察成骨細胞分別在CHA和β-TCP上的增殖情況,用直接計數(shù)法檢測第3、5、7d成骨細胞與CHA、β-TCP接種復(fù)合培養(yǎng)的細胞增殖率;再用MTT法分析復(fù)合培養(yǎng)第3、5、7d時,CHA、β-TCP對成骨細胞增殖的影響;用PNPP法檢測第3、5、7d時,CHA

4、、β-TCP對成骨細胞ALP活性的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1.誘導(dǎo)St2細胞向成骨細胞分化,進行成骨細胞的鑒定:Gomori鈣鈷法,ALP染色后細胞呈強陽性反應(yīng)胞漿內(nèi)呈現(xiàn)灰黑色顆粒;茜素紅礦化結(jié)節(jié)染色后礦化結(jié)節(jié)呈現(xiàn)深紅色,結(jié)節(jié)周圍細胞胞漿也呈紅染。
　　 2.直接計數(shù)法檢測成骨細胞與CHA、β-TCP接種復(fù)合培養(yǎng)的細胞增殖情況:
　　 2.1 CHA、β-TCP表面的成骨細胞隨著培養(yǎng)時間的延長,細胞數(shù)

5、量逐漸增加,CHA、β-TCP均具有較好的細胞相容性。
　　 2.2成骨細胞在CHA表面的增殖速度較β-TCP快。
　　 3.MTT法檢測β-TCP、CHA對成骨細胞增殖及活力顯示:成骨細胞在CHA表面的增殖活性高于β-TCP。
　　 4.PNPP法檢測各組ALP活性結(jié)果顯示:Obs+CHA組ALP活性表達高于Obs+β-TCP組(p＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.成骨細胞在CHA上增殖速