大熊貓亞成體獸舍空氣中可培養(yǎng)細(xì)菌種類分析以及兩株新種細(xì)菌的多相分類學(xué)研究.pdf

1、作為圈養(yǎng)大熊貓的重要場(chǎng)所和青少年科普教育基地，大熊貓繁育基地每天接待大量國內(nèi)外游客參訪。大熊貓獸舍附近是游客經(jīng)常駐足觀光的地方，其空氣質(zhì)量與游客多少呈現(xiàn)關(guān)聯(lián)。獸舍空氣質(zhì)量直接影響大熊貓的健康，甚至可能誘發(fā)某些疾病的發(fā)生。一直以來，人們很少關(guān)注圈養(yǎng)大熊貓獸舍的微生物狀況。本研究通過自然沉降法收集培養(yǎng)大熊貓亞成體獸舍空氣中的可培養(yǎng)細(xì)菌，并進(jìn)行分類鑒定，以評(píng)估獸舍空氣中微生物是否會(huì)對(duì)大熊貓形成不良影響。分離得到28株細(xì)菌，并對(duì)其中2株新種細(xì)菌

2、進(jìn)行了多項(xiàng)分類學(xué)研究，研究結(jié)果如下:
　　1.大熊貓亞成體獸舍可培養(yǎng)細(xì)菌種類及耐藥性分析
　　通過菌落形態(tài)特征觀察，分離純化出28株細(xì)菌。經(jīng)16S rRNA序列分析和聚類分析發(fā)現(xiàn)，這些細(xì)菌分屬17個(gè)屬:微球菌屬（Micrococ cus）、明串珠菌屬(Leuconostoc)、葡萄球菌屬(Staphylococcus)、志賀菌屬（Shigella）、埃希菌屬（Escherichia）、假單胞菌屬（Pseudomonas）、考

3、克氏菌屬（Kocuria）、芽孢桿菌屬(Bacillus)、摩根氏菌屬（Morganella）、微小桿菌屬（Exiguobacterium）、不動(dòng)桿菌屬（Acinetobacter）、巨型菌屬（Macrococcus）、羅氏菌屬（Rothia）、迪茨氏菌屬（Dietzia）、西地西菌屬（Cedecea）、金黃桿菌屬（Chryseobacterium）和溶桿菌屬(Lysobacter)。其中，葡萄球菌屬、志賀菌屬和金黃桿菌屬等屬的某些細(xì)菌

4、為條件致病菌，在動(dòng)物機(jī)體處于應(yīng)激或者免疫力低下時(shí)易引發(fā)感染。大熊貓亞成體獸舍中出現(xiàn)這些常見的條件性致病菌證實(shí)大熊貓存在感染的潛在風(fēng)險(xiǎn)。
　　藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，這17個(gè)屬的細(xì)菌均存在不同程度的耐藥性，且普遍存在多重耐藥現(xiàn)象，至少耐三種抗生素，多達(dá)14耐。其中對(duì)青霉素G、林可霉素、呋喃唑酮、磺胺甲基異惡唑和氨芐西林的耐藥性最為嚴(yán)重，至少有10種菌耐這些抗生素;氟苯尼考、多西環(huán)素、丁胺卡那、恩諾沙星、慶大霉素、環(huán)丙沙星和鏈霉素這7種抗生

5、素幾乎對(duì)所有細(xì)菌都敏感。由此可見，大熊貓亞成體獸舍是某些耐藥細(xì)菌的儲(chǔ)存地。
　　2.菌株CF21T的多相分類學(xué)研究
　　CF21T在TSA和LB瓊脂培養(yǎng)基上均能較好的生長(zhǎng)，在LB平板上生長(zhǎng)3天后為米白色半透明，表面光滑，且微微向上凸起的圓形菌落。革蘭氏染色為陰性、短桿狀;透射電鏡下觀察為球桿狀，長(zhǎng)0.90-0.95μm，寬0.60-0.65μm，無鞭毛。菌株CF21T生長(zhǎng)的NaCl范圍為0-2％(w/v)（最適范圍為0-1％

6、），溫度范圍為10℃-40℃（最適溫度為28℃-30℃），pH范圍為6.0-9.0(最適pH范圍為6.0-7.0)，需氧，無運(yùn)動(dòng)性。過氧化氫酶和氧化酶檢測(cè)均為陽性;可以降解淀粉、明膠，不能降解Tween80;不能將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽;不產(chǎn)生吲哚和硫化氫;無β-半乳糖苷酶、鳥氨酸脫羧酶活性和精氨酸脫羧酶活性;同時(shí)也不能利用多種碳源。CF21T的主要極性脂構(gòu)成為二磷脂酰甘油(diphosphatidylglycerol，DPG)磷脂酰甘油

7、(phosphatidylglycerol，PG)、磷脂酰乙醇胺(Phosphatidylethanolamine，PE)和一個(gè)未知的磷脂;主要呼吸醌為Q-8;主要脂肪酸為iso-C16∶0(30.22％)，iso-C15∶0(25.70％)和the sum of9/10-methyl C16∶0 and/or iso-C17∶1ω9c(21.94％);基因組DNA的G+C構(gòu)成比為68.72 mol％;16S rRNA基因序列分析結(jié)果顯

8、示菌株CF21T屬于溶桿菌屬(Lysobacter)，與L.ruishenii CTN-1T的16SrRNA序列同源性(95.1％)最高;gyrB序列分析也顯示菌株CF21T屬于溶桿菌屬的成員;與L.ruishenii CTN-1T的雜交率為56％?；谝陨辖Y(jié)果分析，菌株CF21T為溶桿菌屬的一個(gè)新種，命名為L(zhǎng)ysobacter chengduensis sp.nov.，且該種模式菌株為CF21T(=CGMCC1.15145T=DSM1

9、00306T)。
　　3.菌株25-1T的多相分類學(xué)研究
　　菌株25-1T在TSA和LB培養(yǎng)基上均能較好的生長(zhǎng)，在LB平板上生長(zhǎng)3天后為金黃色不透明且向上凸起的、邊緣整齊的圓形菌落。革蘭氏染色為陰性、桿狀。透射電鏡下觀察為桿狀無鞭毛，長(zhǎng)0.88-0.92μm，寬0.44-0.48μm。菌株25-1T生長(zhǎng)的NaCl范圍為0-2％(w/v)（最適范圍為0-0.5％），溫度范圍為10℃-40℃（最適溫度為28℃-30℃），pH范

10、圍為6.0-9.0（最適pH范圍為6.0-7.0），需氧，無運(yùn)動(dòng)性。過氧化氫酶和氧化酶檢測(cè)均為陽性，可以降解淀粉和Tween80，不能降解明膠，不能將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，不產(chǎn)生吲哚和硫化氫，無β-半乳糖苷酶活性，無精氨酸脫羧酶活性，有鳥氨酸脫羧酶活性，不能利用多種碳源。菌株25-1T的主要極性脂為磷脂酰乙醇胺和兩個(gè)未知的氨基脂和兩個(gè)未知的脂;主要呼吸醌為MK-6;主要脂肪酸為iso-C15∶0(44.0％)，iso-C17∶03OH(

11、19.8％),summed feature3(C16∶1ω7c and/or C16∶1ω6c,12.7％)和summed feature9(10-methyl C16∶0and/or iso-C17∶1ω9c，7.8％);基因組DNA的G+C構(gòu)成比為36.2 mol％;16S rRNA基因序列分析結(jié)果顯示菌株25-1T屬于金黃桿菌屬（Chryseobacterium），與C.carnis G81T的16S rRNA序列同源性為96.4

12、％，與C.lathyri RBA2-6T的同源性為95.8％; gyrB序列分析也顯示菌株25-1T屬于金黃桿菌屬;與C.lathyri RBA2-6T的雜交率為38％?；谝陨辖Y(jié)果分析，菌株25-1T為金黃桿菌屬的一個(gè)新種，將其命名為Chryseobacterium chengduensis sp.nov.，且該種模式菌株為25-1T=(CCTCC AB2015133T=DSM100396T)。
　　通過研究發(fā)現(xiàn)，大熊貓亞成體獸