厄貝沙坦對高脂飼養(yǎng)大鼠脂肪肝PPARγ表達(dá)及胰島素抵抗的影響.pdf

1、目的：采用高脂飲食建立NAFLD大鼠模型,探討大鼠肝臟組織中過氧化物酶體增殖劑激活受體γ在非酒精性脂肪肝病發(fā)病機(jī)理中的作用,同時觀察厄貝沙坦對肝組織過氧化物酶體增殖劑激活受體γmRNA和蛋白的表達(dá)的影響,探討其可能的治療機(jī)制,為其更廣泛的臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。
　　方法：1.動物模型的建立及標(biāo)本的采集:將45只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,隨機(jī)分成正常組(NC組,n=15):給予正常飼料;高脂組(H

2、F組,n=15),厄貝沙坦組(HI組,n=15):給予高脂飼料。厄貝沙坦組于實驗第2周始給予厄貝沙坦50mg/kg/d,以1mg/ml的濃度溶解灌胃,每日一次,持續(xù)至第8周末。同時高脂組和正常組分別給予等量的生活飲用水灌胃。于各個評估點分別處死各組大鼠5只,自腹主動脈采血,迅速取出肝臟,按常規(guī)備血清以及肝組織。
　　2.檢測指標(biāo):全自動生化分析儀測定血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、血脂,葡萄糖氧化酶法測定空

3、腹血糖(FBG);放免法測定血清空腹胰島素(FINS),計算胰島素抵抗指數(shù)=(FBS×FINS/22.5)。肝組織石蠟切片,行蘇木素-伊紅染色,光鏡下評估肝組織脂肪變性程度及炎癥活動度計分。分別以免疫組織化學(xué)染色、反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)和蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測肝組織PPARγmRNA和蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：1.4周末,高脂組大鼠出現(xiàn)脂質(zhì)代謝紊亂,血清轉(zhuǎn)氨酶水平較正常組升高,血清空腹血糖、空腹胰島素和胰島素抵抗指數(shù)較正常組升高(7.16

4、±0.29vs6.22±0.64、55.01±8.01vs45.50±5.40和1.24±0.05vs1.10±0.09)分別為P<0.05、P<0.05和P<0.01;肝臟PPARγmRNA和蛋白表達(dá)均較正常組降低(0.95±0.06vs2.09±0.40和0.23±0.06vs0.69±0.12)為P<0.01;肝組織出現(xiàn)了輕度脂肪變,多為小泡性脂肪變。厄貝沙坦組大鼠各項指標(biāo)均明顯改善;胰島素抵抗指數(shù)較高脂組降低(1.14±0.03

5、vs1.24±0.05)為P<0.05;肝組織PPARγ蛋白有所增高(0.52±0.10vs0.23±0.06)為P<0.05。
　　2.6周末,高脂組大鼠出現(xiàn)了明顯的脂質(zhì)代謝紊亂,血清轉(zhuǎn)氨酶水平較正常組升高,血清空腹血糖、空腹胰島素和胰島素抵抗指數(shù)較正常組升高(8.16±0.59vs6.79±0.42、64.92±2.42vs38.13±7.58和1.37±0.04vs1.05±0.06)分別為P<0.01、P<0.05和P<0

6、.01;肝臟PPARγmRNA和蛋白表達(dá)均較正常組降低(0.74±0.07vs2.06±0.32和0.15±0.03vs0.49±0.11)為P<0.01;肝組織出現(xiàn)了中至重度脂肪變及氣球樣變,肝小葉內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤和散在的點狀壞死。厄貝沙坦組大鼠各項指標(biāo)均明顯改善;血清空腹血糖、空腹胰島素和胰島素抵抗指數(shù)較高脂組減低(7.25±0.46vs8.16±0.59、49.78±2.44vs64.92±2.42和1.20±0.04vs1.37±

7、0.04)分別為P<0.05、P<0.01和P<0.01;肝組織PPARγmRNA和蛋白均有所增高(1.15±0.13vs0.74±0.07和0.32±0.09vs0.15±0.03)為P<0.05。
　　3.8周末高脂組大鼠和正常組相比,血脂和肝臟轉(zhuǎn)氨酶水平明顯升高,血清空腹血糖、空腹胰島素和胰島素抵抗指數(shù)較正常組升高(8.81±0.27vs6.54±0.85、73.80±3.85vs41.17±7.34和1.46±0.21vs

8、1.07±0.10)分別為P<0.01、P<0.01和P<0.05;肝臟PPARγmRNA和蛋白表達(dá)均較正常組降低(0.53±0.12vs1.59±0.13和0.12±0.03vs0.33±0.07)為P<0.01;肝組織出現(xiàn)重度脂肪變及氣球樣變,肝小葉內(nèi)見不同程度的炎癥細(xì)胞浸潤和點狀壞死。厄貝沙坦組大鼠各項指標(biāo)均明顯改善;血清空腹血糖、空腹胰島素和胰島素抵抗指數(shù)較高脂組減低(7.82±0.45vs8.81±0.27、54.17±4.7

9、4vs73.80±3.85和1.25±0.04vs1.46±0.21)分別為P<0.05、P<0.01和P<0.05;肝組織PPARγmRNA和蛋白均有所增高(0.77±0.14vs0.53±0.12和0.23±0.08vs0.12±0.03)為P<0.05。
　　結(jié)論：高脂飼料喂養(yǎng)SD大鼠可以成功復(fù)制NAFLD模型;NAFLD發(fā)生機(jī)制與肝臟中PPARγmRNA表達(dá)下降有關(guān);厄貝沙坦組可在一定程度上減輕肝臟脂肪變性和炎癥程度,其作