HBV感染食蟹猴肝細胞的研究.pdf

1、乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染可誘發(fā)肝炎、肝硬化，甚至肝癌，是嚴重威脅人類健康的疾病之一。在HBV相關研究中，研究人員建立了一系列HBV感染的細胞和動物模型。雖然這些模型極大地推動了HBV致病機制的研究，并為抗HBV治療藥物的開發(fā)做出了不可磨滅的貢獻，但是目前應用的HBV感染模型由于缺乏與人類相同的自然感染過程，因此，無論在機制研究還是藥物開發(fā)應用中，都無法完全勝任。
　　研究發(fā)現(xiàn)，鈉離子/牛黃膽酸

2、共轉運多肽(NTCP)是HBV感染肝細胞的重要功能受體。NTCP迅速成為抗HBV新藥研究的重要靶標，同時也為研究建立新型的HBV感染模型提供了靶向。實驗研究已證實，表達人NTCP的HepG2細胞和Huh7細胞可被HBV感染。
　　本課題研究中，為探索人NTCP能否介導HBV感染食蟹猴原代肝細胞，首先將人NTCP基因克隆到慢病毒包裝載體后包裝成慢病毒;然后借助慢病毒將人NTCP導入HepG2和Huh7細胞，細胞DNA和RNA的探針法

3、real-time PCR檢測結果和蛋白質水平的蛋白質印跡檢測結果表明人NTCP可在細胞內表達;將表達人NTCP的上述細胞與HBV共培養(yǎng)，細胞培養(yǎng)上清HBsAg的ELISA定量結果表明，表達人NTCP的HepG2和Huh7細胞能夠被HBV感染。然后，將人NTCP基因借助慢病毒導入食蟹猴原代肝細胞，細胞DNA和RNA的探針法real-time PCR檢測結果表明人NTCP不能在肝細胞內表達，可能的原因是食蟹猴NTCP抑制了人NTCP的表達

4、。最后，借助CRISPR/Cas9技術敲除食蟹猴NTCP，并再次將人NTCP導入肝細胞內，細胞DNA和RNA的探針法real-time PCR檢測結果表明在敲除食蟹猴NTCP后，人NTCP可以在肝細胞內表達;然后用HBV感染表達人NTCP的肝細胞，細胞培養(yǎng)上清HBsAg的ELISA定量結果表明，表達人NTCP的肝細胞不能被HBV感染。綜上，人NTCP可以介導HBV感染HepG2細胞和Huh7細胞，但是不能介導HBV感染食蟹猴原代肝細胞，