食蟹猴胚胎構(gòu)建、移植和卵母細(xì)胞體外成熟研究.pdf

1、非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物是人類神經(jīng)生理學(xué)、心理學(xué)和行為學(xué)、老年學(xué)等研究的重要且理想的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。由于與人類認(rèn)知能力上的差異，轉(zhuǎn)基因大小鼠模型已經(jīng)被證明不能滿足腦功能相關(guān)機(jī)理和疾病研究的需要。構(gòu)建非人靈長(zhǎng)類轉(zhuǎn)基因模式動(dòng)物的需求日益高漲，這就推動(dòng)了非人靈長(zhǎng)類輔助生殖技術(shù)研究的開(kāi)展。 本論文第一部分以食蟹猴為研究對(duì)象，對(duì)65只母猴進(jìn)行超數(shù)排卵處理比較了不同超排方案的效果，優(yōu)選出了GnRH拮抗劑+rFSH(普利康)/hCG的最佳超排方案。經(jīng)腹腔鏡引

2、導(dǎo)的微創(chuàng)手術(shù)采集卵母細(xì)胞，得到的總卵母細(xì)胞數(shù)為31．8枚/只，其中MⅡ期卵母細(xì)胞數(shù)為10.6枚/只。采用IVF和ICSI兩種方法對(duì)采集的MⅡ期卵母細(xì)胞進(jìn)行胚胎構(gòu)建，結(jié)果表明經(jīng)ICSI的受精率高于IVF，差異達(dá)極顯著(43.5±11.6％vs 22.5±7.2％，P<0.01)。將51枚優(yōu)質(zhì)原核期胚胎(IVF：21枚，ICSI：30枚)通過(guò)腹腔鏡引導(dǎo)的微創(chuàng)手術(shù)法移植至25只受體母猴的輸卵管內(nèi)，得到四只懷孕受體，其中兩只已經(jīng)產(chǎn)仔，一只待產(chǎn)，

3、一只流產(chǎn)，受體懷孕率和胚胎著床率分別是16％(4/25)和7.8％(4/51)。根據(jù)受體分組情況，血液中E2鋒出現(xiàn)兩天后移植的受體懷孕率和胚胎著床率分別是50％(3/6)和25％(3/12)。 針對(duì)超數(shù)排卵獲得的近2/3處于MⅠ和GV期的卵母細(xì)胞，論文第二部分開(kāi)展了不同培養(yǎng)因子對(duì)卵母細(xì)胞體外成熟影響的研究，以期獲得更多的MⅡ期卵母細(xì)胞，并且探討食蟹猴卵母細(xì)胞體外成熟機(jī)制。首先檢查了血清對(duì)MⅠ期卵母細(xì)胞成熟及受精的影響，結(jié)果表明血

4、清促進(jìn)其核成熟(67.2±24.3％Vs 55.1±16.5％，P<0.05)，但對(duì)受精沒(méi)有影響。將裸GV期卵母細(xì)胞分為有無(wú)顆粒細(xì)胞兩組進(jìn)行體外培養(yǎng)。無(wú)顆粒細(xì)胞組，EGF、促性腺激素(PMSG+hCG)和聯(lián)合應(yīng)用對(duì)其GVBD的能力均沒(méi)有影響，而促性腺激素可以顯著促進(jìn)其達(dá)到MII的能力(37.5±8.9％vs 17.6±6.8％，P<0.05)，聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，EGF反而抑制了促性腺激素促M(fèi)II作用；顆粒細(xì)胞組，與對(duì)照相比，EGF和促性腺激素

5、聯(lián)合時(shí)GVBD(75.0±0.0％VS 57.1±9.6％，P<0.05)和MII(58.3±7.2％VS 35.7±9.9％，P<0.05)的比例顯著增加。組間比較結(jié)果表明顆粒細(xì)胞對(duì)GV期卵母細(xì)胞體外成熟的GVBD(75.0±0.0％VS 51.6±9.6％，P<0.05)和MII(58.3±7.2％vs22.6±8.4％,P<0.05)也都有明顯的促進(jìn)作用。通過(guò)COCs培養(yǎng)進(jìn)一步驗(yàn)證了EGF與促性腺激素協(xié)同促成熟的作用，同時(shí)，Wes