蘋果綿蚜的抗藥性監(jiān)測(cè)及機(jī)理初探.pdf

1、蘋果綿蚜屬同翅目、癭綿蚜科，是蘋果屬果樹的重要害蟲，也是世界檢疫性對(duì)象。蘋果綿蚜目前在我國(guó)分布廣泛，對(duì)蘋果等果業(yè)生產(chǎn)構(gòu)成嚴(yán)重威脅。化學(xué)防治一直以來(lái)是控制蘋果綿蚜的重要手段，隨著殺蟲劑的大量使用，不可避免地會(huì)引起蘋果綿蚜抗性的產(chǎn)生。然而，目前有關(guān)蘋果綿蚜抗性監(jiān)測(cè)的研究鮮有報(bào)道。
　　本文通過(guò)對(duì)三種生測(cè)方法進(jìn)行比較，選擇浸葉法為最適合蘋果綿蚜的室內(nèi)生測(cè)方法，并利用此法測(cè)定了不同種群對(duì)常用藥劑的抗性水平，同時(shí)測(cè)定比較了解毒代謝酶活力，克

2、隆獲得了吡蟲啉的作用靶標(biāo)——煙堿型乙酰膽堿受體（nAChR）兩個(gè)亞基cDNA的全長(zhǎng)序列，并分析了不同抗性水平的蘋果綿蚜種群中這兩個(gè)基因氨基酸序列的差異，以期為蘋果綿蚜的抗性監(jiān)測(cè)與治理提供理論依據(jù)。研究結(jié)果對(duì)于指導(dǎo)各地蘋果綿蚜的有效治理，明確其抗性風(fēng)險(xiǎn)及抗性機(jī)理具有重要的理論和實(shí)際意義。
　　1.蘋果綿蚜生測(cè)方法比較及抗藥性監(jiān)測(cè)
　　為了明確我國(guó)蘋果綿蚜的抗性現(xiàn)狀和分布，通過(guò)比較確定蘋果綿蚜合適的生測(cè)方法并對(duì)山東濟(jì)南、江蘇豐縣

3、、新疆察布查爾蘋果綿蚜進(jìn)行抗性監(jiān)測(cè)。采用浸葉法、點(diǎn)滴法、藥膜法等生測(cè)方法測(cè)定山東濟(jì)南蘋果綿蚜對(duì)毒死蜱、吡蟲啉、高效氯氟氰菊酯三種藥劑的敏感性，并對(duì)三種生測(cè)方法進(jìn)行了分析比較。結(jié)果表明三種方法對(duì)蘋果綿蚜的室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果一致，均為毒死蜱、高效氯氟氰菊酯、吡蟲啉的毒力依次降低。綜合比較各種方法的優(yōu)缺點(diǎn)，浸葉法由于操作簡(jiǎn)單，更貼近農(nóng)田噴藥實(shí)際情況且結(jié)果穩(wěn)定被選擇為蘋果綿蚜最適合的生測(cè)方法。
　　利用浸葉法于2014-2015年進(jìn)行抗性測(cè)

4、定，以察布查爾2014蘋果綿蚜為相對(duì)敏感種群，結(jié)果發(fā)現(xiàn):對(duì)于毒死蜱，濟(jì)南、察布查爾和豐縣種群分別表現(xiàn)為中等水平抗性、低水平抗性和低敏感性;對(duì)于高效氯氟氰菊酯，2015年濟(jì)南、豐縣種群均達(dá)到高水平抗性，察布查爾種群達(dá)到極高水平抗性;對(duì)于吡蟲啉，2014年、2015年濟(jì)南種群分別產(chǎn)生了63.54和63.70倍的抗性，達(dá)到高水平抗性;2015年察布查爾和豐縣種群抗種群都產(chǎn)生了極高水平的抗性。研究結(jié)果表明測(cè)試地區(qū)的蘋果綿蚜對(duì)三種藥劑產(chǎn)生了不同程

5、度的抗性，尢以對(duì)吡蟲啉的抗性最為嚴(yán)重，防治中應(yīng)注意藥劑的合理輪用延緩抗性加劇。
　　2.不同蘋果綿蚜種群解毒代謝酶活力測(cè)定
　　為了進(jìn)一步闡明蘋果綿蚜的抗性生化機(jī)理，測(cè)定比較了山東濟(jì)南、江蘇豐縣、新疆察布查爾和陜西乾縣四個(gè)地區(qū)蘋果綿蚜種群的全酯酶活力和谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶活力。結(jié)果表明:濟(jì)南、察布查爾和乾縣三個(gè)種群的全酯酶活力之間無(wú)明顯差異，豐縣種群的活力卻明顯低于三者;對(duì)于谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶，豐縣和察布查爾種群的酶活力顯

6、著高于濟(jì)南種群。結(jié)合幾個(gè)種群的抗性監(jiān)測(cè)結(jié)果，推測(cè)谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶活力的升高可能是蘋果綿蚜對(duì)高效氯氟氰菊酯和吡蟲啉產(chǎn)生抗性的原因之一。
　　3.蘋果綿蚜煙堿型乙酰膽堿受體(nAChR)基因的克隆及點(diǎn)突變分析
　　為了全面揭示蘋果綿蚜對(duì)吡蟲啉的抗性機(jī)理，利用PCR和RACE技術(shù)克隆蘋果綿蚜nAChR亞基基因，獲得nAChRα2和nAChRα5亞基cDNA的全長(zhǎng)序列，分別命名為Elα2和Elα5。Elα2亞基全長(zhǎng)共2064 b