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文檔簡介
1、目的:分離膀胱移行細(xì)胞癌中差異表達(dá) microRNAs,用 miRNA芯片技術(shù)篩選差異表達(dá) microRNAs,實(shí)時(shí)熒光定量 PCR驗(yàn)證其表達(dá)量。探討差異表達(dá)microRNAs在膀胱移行細(xì)胞癌中的作用機(jī)制。
方法:取5例膀胱移行細(xì)胞癌(術(shù)前活檢及術(shù)后病理檢測結(jié)果均證實(shí)為膀胱移行細(xì)胞癌)患者手術(shù)切除的新鮮膀胱癌組織標(biāo)本做為膀胱癌組;1例良性前列腺增生患者的膀胱粘膜組織標(biāo)本做為對照組(與各樣本分別作對照)。Trizol法提取總 R
2、NA,用紫外線吸收測定法行 RNA質(zhì)量檢測。采用 miRCURYTM Array Power標(biāo)記試劑盒,用標(biāo)記酶 Hy3TM熒光集團(tuán)標(biāo)記 miRNA得到用于與芯片雜交的熒光探針,在標(biāo)準(zhǔn)條件下使用 PhalanxTM的熱收縮雜交袋將標(biāo)記好的探針和miRCURYTM芯片雜交。使用 GenePix4000B芯片掃描儀掃描芯片的熒光強(qiáng)度,并將實(shí)驗(yàn)結(jié)果轉(zhuǎn)換成數(shù)字型數(shù)據(jù)保存。使用 Genepix Pro6.0軟件獲取熒光掃描圖像和對原始數(shù)據(jù)進(jìn)行分析
3、運(yùn)算。選取各樣本表達(dá)均上調(diào)及下調(diào)的miRNAs各5個(gè),用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR技術(shù)驗(yàn)證芯片實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
結(jié)果:1﹑所提取的RNA經(jīng)過質(zhì)量檢測符合芯片實(shí)驗(yàn)需求。2﹑膀胱癌組分別和對照組芯片研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)2340個(gè) miRNA差異表達(dá)。有131個(gè) miRNA在膀胱移行細(xì)胞癌中差異表達(dá)顯著且表達(dá)一致(其中43個(gè)表達(dá)顯著上調(diào),88個(gè)表達(dá)顯著下調(diào))。3﹑選取各膀胱癌標(biāo)本中均表達(dá)顯著上調(diào)的has-miR-429, has-miR-29b, ha
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