miRNAs靶向調(diào)節(jié)人牙周膜細(xì)胞骨向分化中PLAP-1基因表達(dá)研究.pdf

1、研究背景:
　　 牙周組織(periodontaltissues，PDT)包括牙齦、牙周膜及礦化組織牙骨質(zhì)和牙槽骨。由于其組成多樣性及軟、硬結(jié)締組織、上皮之間相互作用使牙周組織發(fā)生改建與愈合比一般軟組織更復(fù)雜。正常牙周組織具有改建再生能力，如牙齒生理移動(dòng)過(guò)程中有牙周膜改建，牙骨質(zhì)、牙槽骨新骨形成，特別是成骨現(xiàn)象，主要是生理反應(yīng)，不是病理?yè)p傷組織再生。當(dāng)牙周病理?yè)p傷發(fā)生炎癥時(shí)波及牙周膜和牙槽骨，引起牙周附著喪失甚至導(dǎo)致牙齒缺失，其

2、再生能力非常有限，影響功能和美觀?，F(xiàn)代最有效牙周治療概念要求實(shí)現(xiàn)牙周組織再生(periodontaltissueregeneration，PDTR)，即有新的牙槽骨、牙骨質(zhì)及插入其中的膠原纖維產(chǎn)生。牙周再生修復(fù)是一個(gè)復(fù)雜的連續(xù)過(guò)程，其中礦化是牙周硬組織形成的重要階段，在這一生物礦化過(guò)程與鈣鹽的沉積、堿性磷酸酶活性有關(guān)，這是一個(gè)重要課題，其中調(diào)節(jié)牙周組織礦化相關(guān)細(xì)胞向有利于牙周組織再生方向發(fā)展的相關(guān)因素研究是未來(lái)研究的方向。
　　

3、 牙周膜細(xì)胞(periodontalligamentcells，PDLCs)是一個(gè)異質(zhì)性間充質(zhì)細(xì)胞群，組成具有多樣性特點(diǎn)，包括成纖維細(xì)胞、成骨細(xì)胞、成牙骨質(zhì)細(xì)胞以及這些細(xì)胞的前體細(xì)胞和具有多向分化潛能的干細(xì)胞，具有可分化為成骨細(xì)胞和成牙骨質(zhì)細(xì)胞等礦化細(xì)胞的能力，因此具有極高的骨向分化潛能。有趣的是，在體內(nèi)正常環(huán)境下，PDL為堅(jiān)韌而富有彈性的結(jié)締組織且終生不被骨質(zhì)化，保持著一種自身穩(wěn)定(homeostasisofperiodontium)

4、的動(dòng)態(tài)平衡。牙周膜細(xì)胞在維持這種自身穩(wěn)定的過(guò)程中起著極其重要的平衡作用，有研究顯示牙周膜細(xì)胞相關(guān)多種因素如基因、蛋白、細(xì)胞因子等參與組織再生和自身穩(wěn)定平衡過(guò)程的調(diào)節(jié)，而有關(guān)牙周膜細(xì)胞在組織再生與自身穩(wěn)定過(guò)程中的分子調(diào)節(jié)機(jī)制和分子調(diào)節(jié)信號(hào)通路等之間關(guān)系目前尚不清楚。
　　 牙周膜相關(guān)蛋白1(periodontalligamentassociatedprotein-1，PLAP-1)是新近發(fā)現(xiàn)的牙周組織專一性胞外基質(zhì)蛋白(Extra

5、cellularmatrix，ECM)，是一種牙周膜鈣化和礦化調(diào)節(jié)劑，在牙周膜新陳代謝，牙周組織改建、再生和維持牙周組織穩(wěn)定中發(fā)揮重要作用的基因。2006年由Yamada等.首次發(fā)現(xiàn)并命名為PLAP-1，報(bào)道其極高表達(dá)于牙周組織，證實(shí)PLAP-1的表達(dá)水平隨牙周膜細(xì)胞礦化而升高。隨后，多家實(shí)驗(yàn)室的數(shù)據(jù)顯示，F(xiàn)GF-2抑制PLAP-1的表達(dá)，而BMP-2上調(diào)PLAP-1的表達(dá);PLAP-1在牙周膜中發(fā)揮了負(fù)性調(diào)節(jié)牙周膜細(xì)胞分化和礦化的作用

6、，阻止牙周組織發(fā)生非生理狀態(tài)下的骨化;以小鼠牙周膜細(xì)胞為模型，過(guò)表達(dá)PLAP-1使得堿性磷酸酶活性和形成礦化結(jié)節(jié)的能力受到抑制，通過(guò)調(diào)節(jié)BMP-2的活性抑制了牙周膜細(xì)胞的分化和礦化;PLAP-1阻礙BMP-2與其受體BMPR-IB的結(jié)合，抑制了BMP-2信號(hào)通路，從而抑制了礦化分化。PLAP-1在牙周韌帶中的表達(dá)受到礦化相關(guān)因子FGF，Smad，BMP-2，Runx2等影響，但具體的分子調(diào)節(jié)機(jī)理，尤其對(duì)PLAP-1基因轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)節(jié)機(jī)

7、理目前尚不明了。
　　 microRNAs(miRNAs)是一類進(jìn)化上保守的非編碼小分子RNA，廣泛存在于真核生物中，是一組不編碼蛋白質(zhì)的短序列RNA，它本身不具有開放閱讀框(ORF)，通常的長(zhǎng)度為20～24nt，但在3'端可以有1～2個(gè)堿基的長(zhǎng)度變化，具有在翻譯水平調(diào)控基因表達(dá)的功能。尤其miRNAs是參與靶基因功能作用調(diào)節(jié)的重要因子，具有組織特異性和時(shí)序性，在轉(zhuǎn)錄后水平抑制或降解蛋白翻譯，成為近幾年的研究熱點(diǎn)。有關(guān)牙周膜細(xì)胞

8、骨向分化調(diào)節(jié)組織特異性基因的miRNAs研究很少，參與調(diào)節(jié)牙周膜細(xì)胞成骨分化特異性基因的miRNAs差異表達(dá)及功能調(diào)節(jié)作用的研究國(guó)內(nèi)外尚未見報(bào)道。特別是有關(guān)miRNAs在轉(zhuǎn)錄后水平對(duì)牙周膜相關(guān)特異性基因PLAP-1的表達(dá)調(diào)節(jié)及特異性基因PLAP-1的miRNAs調(diào)節(jié)對(duì)牙周膜細(xì)胞增殖和成骨分化功能作用的影響研究，目前國(guó)內(nèi)外均尚未見報(bào)道。miRNAs是否在牙周膜細(xì)胞骨向分化中發(fā)揮著不可或缺的作用？對(duì)牙周膜細(xì)胞特異性基因的功能調(diào)控如何？對(duì)于這

9、些問(wèn)題的探索和回答都是嶄新的前沿研究領(lǐng)域。因此，本論文旨在研究參與靶向調(diào)節(jié)PLAP-1基因表達(dá)的miRNAs以及其對(duì)靶基因PLAP-1的調(diào)節(jié)作用在人牙周膜細(xì)胞增殖和牙周膜細(xì)胞骨向分化中功能調(diào)節(jié)作用的影響。
　　 本論文主要包括以下四章內(nèi)容:
　　 第一章:PLAP-1基因在人牙周膜細(xì)胞及其骨向分化中的表達(dá)
　　 目的:建立體外培養(yǎng)人牙周膜細(xì)胞及其骨化誘導(dǎo)研究模型，觀察和驗(yàn)證體外培養(yǎng)人牙周膜細(xì)胞及其骨向分化誘導(dǎo)中P

10、LAP-1基因表達(dá)。
　　 方法:本研究采用體外酶消化法培養(yǎng)人牙周膜細(xì)胞并進(jìn)行間充質(zhì)來(lái)源細(xì)胞表面標(biāo)記檢測(cè)，用MTT法、茜素紅及VonKossa染色、免疫組化、ALP、RT-PCR和Westernblot等方法進(jìn)行檢測(cè)牙周膜細(xì)胞增殖及PLAP-1基因在人牙周膜細(xì)胞及其骨向分化誘導(dǎo)中的表達(dá)模式。
　　 結(jié)果:本實(shí)驗(yàn)成功培養(yǎng)人牙周膜細(xì)胞模型并成功進(jìn)行牙周膜細(xì)胞骨向分化誘導(dǎo)，細(xì)胞增殖和礦化狀態(tài)良好，檢測(cè)PLAP-1基因在人牙周膜

11、細(xì)胞中大量分布，主要分布在細(xì)胞核周圍的細(xì)胞漿中，胞漿末端很少，PLAP-1基因在牙周膜細(xì)胞中及其骨向分化誘導(dǎo)進(jìn)行中持續(xù)表達(dá)并隨礦化時(shí)間的進(jìn)行呈逐漸增加趨勢(shì)。
　　 結(jié)論:研究結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)的牙周膜細(xì)胞模型保持了間充質(zhì)來(lái)源細(xì)胞群牙周膜細(xì)胞原有的特性，細(xì)胞增殖狀態(tài)良好，經(jīng)礦化誘導(dǎo)能夠向成骨方向分化并在分化中表現(xiàn)牙周膜特異性基因PLAP-1的正常表達(dá)，為進(jìn)一步研究PLAP-1基因在人牙周膜細(xì)胞及其骨向分化誘導(dǎo)中的表達(dá)變化和分子調(diào)節(jié)

12、機(jī)制提供細(xì)胞模型實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 第二章:miRNAs靶向調(diào)控PLAP-1基因表達(dá)的篩選和驗(yàn)證
　　 目的:篩選和驗(yàn)證靶向調(diào)控牙周膜特異性基因PLAP-1表達(dá)的miRNAs，驗(yàn)證檢測(cè)在人牙周膜細(xì)胞骨向分化中PLAP-1基因和靶向調(diào)控PLAP-1基因表達(dá)的miRNAs的表達(dá)趨勢(shì)及PLAP-1與靶miRNAs在牙周膜細(xì)胞成骨分化中表達(dá)趨勢(shì)的關(guān)聯(lián)性。
　　 方法:首先利用Targetscan、miRBase、micro

13、RNA.org和miRGen-miRanda等生物學(xué)軟件和數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)潛在靶向PLAP-1基因的miRNAs進(jìn)行預(yù)測(cè)分析，然后取四個(gè)軟件共同交集靶位點(diǎn)的miRNAs作為研究對(duì)象，結(jié)果得到307種miRNAs具有潛在靶向調(diào)節(jié)PLAP-1基因的能力，其中有5種為共同交集預(yù)測(cè)miRNAs極具潛在靶向能力的重要信息作為深入研究對(duì)象。為進(jìn)一步篩選驗(yàn)證在牙周膜細(xì)胞中能夠靶向調(diào)節(jié)PLAP-1基因miRNAs，采用雙熒光素酶報(bào)告基因分析系統(tǒng)和定量RT-PC

14、R方法對(duì)靶向調(diào)節(jié)PLAP-1基因的miRNAs進(jìn)行篩選驗(yàn)證并采用定量RT-PCR方法檢測(cè)PLAP-1基因和靶miRNAs在人牙周膜細(xì)胞骨向分化中表達(dá)變化趨勢(shì)，采用定量RT-PCR和Westernblot等方法驗(yàn)證PLAP-1基因和蛋白和靶miRNAs表達(dá)趨勢(shì)與人牙周膜細(xì)胞成骨分化中表達(dá)量變化趨勢(shì)的關(guān)聯(lián)性。
　　 結(jié)果:Targetscan、miRBase、microRNA.org和miRGen-miRanda四個(gè)軟件交集靶位點(diǎn)的

15、miRNAs作為研究對(duì)象，結(jié)果顯示miR144、miR26a、miR26b、miR21和miR101共5種miRNAs為極具潛在靶向調(diào)節(jié)PLAP-1基因能力miRNAs。雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)分析結(jié)果顯示加入PLAP-1基因后各組的熒光素酶活性具有顯著差異(F=11.050，P＜0.001)，采用LSD的多重比較方法表明，psiPLAP-1+miR21的熒光素酶活性分別與psiPLAP+Blank、psiPLAP+miR26a、psiPLA

16、P+miR26b、psiPLAP+miR144比較均有下降，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，psiPLAP-1+miR101的熒光素酶活性分別與psiPLAP+Blank、psiPLAP+miR26a、psiPLAP+miR26b、psiPLAP+miR144比較均有下降，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但是psiPLAP-1+miR26a、psiPLAP-1+miR26b及psiPLAP-1+miR144分別與psiPLA

17、P-1+Blank組進(jìn)行兩兩比較均無(wú)顯著差異(P＞0.05)，說(shuō)明miR21和miR101能夠靶向結(jié)合PLAP-13'UTR從而抑制熒光素酶的活性，可進(jìn)行后續(xù)深入研究。PLAP-1基因在人牙周膜細(xì)胞骨向分化過(guò)程中隨礦化時(shí)間增加，其定量RT-PCR的表達(dá)量不斷增長(zhǎng)變化差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=291.982，P＜0.001)。而靶向調(diào)節(jié)PLAP-1基因的miR21或miR101在人牙周膜細(xì)胞骨向分化過(guò)程中隨礦化時(shí)間增加其定量RT-PCR的表

18、達(dá)量不斷減少且不同時(shí)間點(diǎn)之間的表達(dá)量變化差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，有顯著差異(F=181.266，P＜0.001;F=40.233，P＜0.001)。在牙周膜細(xì)胞中瞬轉(zhuǎn)過(guò)表達(dá)miR21或miR101時(shí)PLAP-1基因表達(dá)變化差異明顯(F=120.691，P=0.001)，其中加入miR21或miR101后，PLAP-1基因的表達(dá)量相比起正常細(xì)胞顯著減少(P=0.012，P=0.002)，變化趨勢(shì)相反。
　　 結(jié)論:miR21和miR1

19、01能夠結(jié)合PLAP-13'UTR靶向調(diào)節(jié)PLAP-1基因表達(dá)，而miR26a，miR26b和miR144則不能。miR21及miR101表達(dá)量變化和靶基因PLAP-1在人牙周膜細(xì)胞骨向分化過(guò)程中表達(dá)量變化分別呈負(fù)相關(guān)變化趨勢(shì)。過(guò)表達(dá)miR21或miR101均可抑制靶基因PLAP-1表達(dá)。因此從5個(gè)候選miRNAs中篩選和鑒定出靶向PLAP-1基因的miRNAs（miR21、miR101）做后續(xù)進(jìn)一步深入研究和分析。
　　 第三

20、章:miR21/miR101靶向調(diào)節(jié)PLAP-1基因的結(jié)合位點(diǎn)分析
　　 目的:分析miR21/miR101靶向調(diào)節(jié)PLAP-1基因的結(jié)合位點(diǎn)。
　　 方法:采用MicroRNA.org軟件結(jié)分析及預(yù)測(cè)miR21或miR101靶向調(diào)節(jié)PLAP-1基因的結(jié)合位點(diǎn)。用雙熒光素酶報(bào)告基因分析系統(tǒng)和定量RT-PCR方法分析miR21或miR101與靶基因PLAP-1的結(jié)合位點(diǎn)，然后對(duì)結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行定點(diǎn)突變并進(jìn)行驗(yàn)證結(jié)合位點(diǎn)分析。<

21、br>　　 結(jié)果:用MicroRNA.org軟件分析預(yù)測(cè)獲得miR21或miR101靶向調(diào)節(jié)PLAP-1基因的結(jié)合位點(diǎn)后，采用雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)分析，結(jié)果顯示在轉(zhuǎn)染克隆有psiPLAP-13'UTR質(zhì)粒的多組間的熒光素酶活性差異進(jìn)行比較具有顯著差異(F=881.425,P＜0.001)，其中psiPLAP-13'UTR+Blank與psiPLAP-13'UTR+NC之間沒(méi)有顯著差異(P＞0.05)，但psiPLAP-13'UTR+

22、miR21、psiPLAP-13'UTR+miR101分別與psiPLAP-13'UTR+NC比較熒光素酶活性均有下降，且具有顯著差異(P=0.008和P＜0.001),psiPLAP-13'UTR+miR21與psiPLAP-13'UTR+miR101相比也有顯著差異(P＜0.05)，這表明psiPLAP-13'UTR質(zhì)粒與miR21或miR101結(jié)合能夠抑制雙熒光素酶活性。另外，在轉(zhuǎn)染克隆有結(jié)合位點(diǎn)定點(diǎn)突變mutpsiPLAP-13

23、'UTR質(zhì)粒+miR21或miR101的實(shí)驗(yàn)組中，其熒光素酶活性與psiPLAP-13'UTR+Blank、psiPLAP-13'UTR+NC組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，結(jié)果表明結(jié)合位點(diǎn)定點(diǎn)突變后mutpsiPLAP-13'UTR質(zhì)粒不能與miR21或miR101結(jié)合，即PLAP-13'UTR與miR21和miR101的結(jié)合位點(diǎn)突變完全，從而不能影響雙熒光素酶活性的變化。
　　 結(jié)論:經(jīng)分析和驗(yàn)證確定miR21和miR

24、101靶向調(diào)節(jié)PLAP-1基因的結(jié)合位點(diǎn)為miR101與靶基因PLAP-13'UTR結(jié)合位點(diǎn)為338-345位點(diǎn)7個(gè)堿基（gtactgt）、miR21與靶基因PLAP-13'UTR結(jié)合位點(diǎn)為748-755位點(diǎn)7個(gè)堿基(ataagct)。根據(jù)本章所得結(jié)果選擇抑制熒光素酶活性較強(qiáng)、調(diào)節(jié)PLAP-1基因表達(dá)量變化較顯著的has-mir-101作為進(jìn)一步研究對(duì)象，探討其與PLAP-1靶基因之間的功能調(diào)節(jié)作用，并深入研究miR101對(duì)PLAP-1

25、靶基因的調(diào)節(jié)對(duì)人牙周膜細(xì)胞增殖和骨向分化等功能作用的調(diào)節(jié)影響。
　　 第四章:miR101靶向調(diào)節(jié)PLAP-1基因的功能研究
　　 目的:研究miR101靶向調(diào)節(jié)PLAP-1基因?qū)ρ乐苣ぜ?xì)胞成骨分化中細(xì)胞增殖和骨化功能的影響。
　　 方法:首先獲得miR101過(guò)表達(dá)和表達(dá)抑制的慢病毒，進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)測(cè)定慢病毒穩(wěn)定感染牙周膜細(xì)胞的MOI值，依此對(duì)牙周膜細(xì)胞進(jìn)行穩(wěn)定轉(zhuǎn)染miR101過(guò)表達(dá)和表達(dá)抑制慢病毒，研究穩(wěn)定轉(zhuǎn)染mi

26、R101過(guò)表達(dá)和表達(dá)抑制慢病毒載體后人牙周膜細(xì)胞增殖和骨向分化誘導(dǎo)過(guò)程中miR101對(duì)PLAP-1基因靶向調(diào)節(jié)對(duì)人牙周膜細(xì)胞增殖和骨向分化功能的影響。采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖周期，誘導(dǎo)牙周膜細(xì)胞骨向分化過(guò)程中用茜素紅染色觀察礦化結(jié)節(jié)形成能力并用酶活性檢測(cè)法檢測(cè)ALP活性變化，采用定量RT-PCR和Westernblot方法檢測(cè)人牙周膜細(xì)胞骨向分化過(guò)程中靶基因PLAP-1基因和蛋白表達(dá)量變化并進(jìn)行比較。
　　 結(jié)果:MTT法檢測(cè)牙

27、周膜細(xì)胞增殖數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示，時(shí)間和分組的主效應(yīng)、時(shí)間和分組的交互效應(yīng)均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=1340.419，P＜0.001;F=703.856，P＜0.001;F=201.765，P＜0.001)?？蛰d組和miR101組在四個(gè)時(shí)間點(diǎn)具有相似的增長(zhǎng)趨勢(shì)，但是anti-miR101組的增長(zhǎng)趨勢(shì)較前兩者緩慢。在剔除了時(shí)間因素的影響下，mir101組和空載組中MTT的OD值較anti-miR101組上調(diào)，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均小于0.00

28、1)。在剔除了分組因素的影響下，四個(gè)時(shí)間點(diǎn)下MTT的OD值均呈上升的趨勢(shì)，且兩兩比較差異都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值均小于0.001）。在固定第七天時(shí)，三組之間的兩兩比較均有顯著差異(P值均小于0.001)。結(jié)果表明過(guò)表達(dá)miR101增強(qiáng)牙周膜細(xì)胞骨化過(guò)程中的細(xì)胞增殖，抑制表達(dá)anti-miR101抑制牙周膜細(xì)胞骨化過(guò)程中的細(xì)胞增殖。
　　 ALP活性測(cè)定數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示時(shí)間和分組的主效應(yīng)(F=190.901，P＜0.001;F=13

29、7.811，P＜0.001)、時(shí)間和分組的交互效應(yīng)均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=47.362,P＜0.001)，其中以anti-miR101組在第0天時(shí)的ALP活性最低，而miR101組在第21天時(shí)ALP活性最高。在剔除了時(shí)間因素的影響下，三組中每?jī)山M的ALP活性值具有顯著差異，其中空載組和anti-miR101組中細(xì)胞ALP活性較miR101組均有下調(diào)（P值均小于0.001）。在剔除了分組因素的影響下，四個(gè)時(shí)間點(diǎn)中每?jī)蓚€(gè)時(shí)間點(diǎn)的ALP活性值均

30、有顯著差異(P值均小于0.001），ALP活性值隨著時(shí)間逐漸上調(diào)。結(jié)果表明過(guò)表達(dá)miR101增強(qiáng)牙周膜細(xì)胞骨化過(guò)程中的鈣鹽沉積，抑制表達(dá)anti-miR101抑制牙周膜細(xì)胞骨化過(guò)程中的鈣鹽沉積。
　　 PLAP-1基因表達(dá)的定量RT-PCR測(cè)定數(shù)據(jù)結(jié)果分析顯示，時(shí)間和分組分別作為主效應(yīng)均具有顯著差異(F=6.400，=0.008;F=48.994，P＜0.001)，時(shí)間和分組之間具有交互作用，也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=6.180，P

31、=0.003)。其中miR101在第21天時(shí)定量PCR的表達(dá)量最低?？蛰d組隨著時(shí)間的變化，定量RT-PCR的值逐漸上調(diào)，而miR101組恰好相反，anti-miR101組定量RT-PCR檢測(cè)表達(dá)量在第7和第14天與miR101基本一致，但在第21天時(shí)比miR101組上調(diào)。在剔除了時(shí)間因素的影響下，miR101組和anti-miR101組中定量RT-PCR檢測(cè)表達(dá)量較空載組均有下調(diào)，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均小于0.001)。在剔除了分組

32、因素的影響下，第14天、第21天三組的表達(dá)量較第7天均上調(diào)，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(分別為P=0.025和P=0.003)?？蛰d組與miR101在第7天、第14天和第21天的定量PCR值均有顯著差異(P值均小于0.001)，結(jié)果說(shuō)明miR101過(guò)表達(dá)抑制了PLAP-1基因表達(dá)量，而anti-miR101抑制表達(dá)后增加了靶基因PLAP-1表達(dá)量。
　　 礦化結(jié)節(jié)形成染色觀察和Westernblot法蛋白檢測(cè)結(jié)果顯示，與空載組比較mi

33、R101過(guò)表達(dá)組礦化結(jié)節(jié)形成數(shù)量和PLAP-1蛋白表達(dá)均呈增加變化趨勢(shì);而與空載組比較anti-miR101抑制表達(dá)組礦化結(jié)節(jié)形成數(shù)量和PLAP-1蛋白表達(dá)均呈減少變化趨勢(shì)。
　　 結(jié)論:研究結(jié)果顯示miR101過(guò)表達(dá)后抑制了靶基因PLAP-1表達(dá)，減弱了PLAP-1基因?qū)ρ乐苣ぜ?xì)胞骨向分化的負(fù)調(diào)節(jié)作用，增強(qiáng)了牙周膜細(xì)胞的增殖和礦化能力，而anti-miR101表達(dá)抑制后增加了PLAP-1基因表達(dá)，增強(qiáng)PLAP-1基因?qū)ρ乐苣ぜ?xì)