OBF-1對MRL-lpr小鼠抗體分泌細胞產生及自身免疫發(fā)展的功能研究.pdf

1、OBF-1(Oct binding factor-1)又稱OCA-B或Bob-1，是B細胞特異性轉錄共激活因子。已發(fā)現OBF-1能調節(jié)B細胞發(fā)育和功能，在OBF-1缺陷小鼠中，B細胞成熟的多個階段受到影響，完全破壞生發(fā)中心的形成，導致體液免疫缺陷。MRL/MpJ-Fas<'lpr/lpr>(MRL-lpr)小鼠以產生自身抗體和免疫復合物介導的腎小球腎炎為特征，是研究系統(tǒng)性紅斑狼瘡的主要模型之一。本研究構建了OBF-1 缺陷MRL-lpr

2、小鼠和OBF-1野生MRL-lpr小鼠，并在這兩種模型小鼠的基礎上，研究OBF-1缺陷對抗體分泌細胞產生及自身免疫發(fā)展的影響。 1 OBF-1缺陷MRL-lpr小鼠及OBF-1野生MRL-lpr小鼠模型的建立將MRL-lpr小鼠與OBF-1缺陷小鼠進行雜交，產生子一代小鼠(F1)，再將F1小鼠雌雄配對產生子二代小鼠(F2)，用PCR對F2小鼠進行基因型鑒定(OBF-1和Fas基因)，從中挑選出OBF-1<'-/->Fas<'-/

3、->小鼠，再與親代小鼠MRL-lpr回交。經如此雜交-回交6～8代，獲得OBF-1缺陷MRL-lpr小鼠(OBF-1<'-/->Fas<'-/->)及OBF-1野生MRL-lpr小鼠(OBF-1<'+/+>Fas<'-/->)。 2 OBF-1缺陷對MRL-lpr小鼠抗體分泌細胞產生和自身免疫發(fā)展的影響2．1 OBF-1缺陷對MRL-lpr小鼠自身免疫發(fā)展的影響選用3-4月齡基因型為OBF-1<'+/+>Fas<'-/->和OB

4、F-1<'-/->Fas<'-/->小鼠各6只，利用夾心ELISA法檢測每只小鼠血清中所有免疫球蛋白、抗雙鏈DNA抗體(ds-DNA抗體)和抗核抗體(ANA)，結果表明OBF-4<'+/+>Fas<'-/->小鼠血清中的所有的免疫球蛋白顯著增高，尤其是IgG亞類(IgG1、Ig2a、IgG3、IgG2b)，其中IgG2a含量最低有5000μg/mL，而OBF-1<'-/->Fas<'-/->小鼠血清IgG各亞類含量均降低，其中IgG2a

5、含量最高僅為200μg/mL。OBF-1<'+/+>Fasb<'-/->小鼠血清中能檢測出自身抗體(抗ds-DNA抗體及抗核抗體)，而在OBF--<'-/->Fas<'-/->小鼠不能檢測到，以上結果顯示表明MRLlpr小鼠OBF-1缺陷可使所有免疫球蛋白水平顯著降低，消除自身抗體。免疫熒光染色發(fā)現OBF-1<'+/+>Fas<'-/->小鼠腎小球有IgG和補體C3沉積，而OBF-1<'-/->Fas<'-/->小鼠腎臟沒有沉積；PAS

6、法染色發(fā)現OBF-1<'+/+>Fas<'-/->小鼠腎小囊腔增大，并形成新月體，而OBF-1<'-/->Fas<'-/->小鼠。腎臟沒有上述現象。結果說明OBF-1缺陷能抑制MRL-lpr小鼠免疫復合物介導的血管球性腎炎的發(fā)生。 2．2 OBF-1缺陷對MRL-lpr小鼠自身抗體產生缺陷的機制通過ELISPOT檢測OBF-1缺陷對MRL-lpr小鼠抗體分泌細胞的影響，OBF-1<'+/+>Fas<'-/->小鼠脾臟檢測到大量I

7、gG抗體分泌細胞(約820個斑點/10<'5>脾細胞)，而OBF-1<'-/->Fas<'-/->小鼠脾臟只檢測到少量IgG抗體分泌細胞(約5個斑點/10<'5>脾細胞)，骨髓中檢測結果與脾臟類似，結果顯示OBF-1對MRL-lpr小鼠抗體分泌細胞的產生是必需的。 通過半定量RT-PCR法檢測對漿細胞特異性基因Blimp-1，Xbp-1，Irf-4，Bcl-6和J鏈的表達，結果表明OBF-1<'+/+>Fas<'-/->小鼠相比

8、，OBF-1<'-/->Fas<'-/->小鼠Irf-4、xbp-1、Blimp-1、Bcl-6 mRNA水平沒有明顯差別，而J鏈mRNA顯著降低。為明確J鏈轉錄是否依賴OBF-1，進而檢測對照小鼠OBF-1<'+/+>小鼠和OBF-1<'-/->小鼠脾臟B細胞J鏈的mRNA表達，兩者mRNA水平無顯著差別，提示OBF-1<'-/->MRL-lpr小鼠J鏈的轉錄抑制可能與lpr和OBF-1的相互作用有關。以上結果表明OBF-1不能在mR

9、NA水平上影響MRL-lpr小鼠抗體分泌細胞的形成。 進而利用流式細胞技術檢測分析B細胞發(fā)育，結果發(fā)現，與OBF-1<'+/+>Fas<'-/->小鼠相比，OBF-1<'-/->MRL-lpr小鼠脾臟和骨髓中的未成熟B細胞(CD19<'+>IgM<'+>)和成熟B細胞(CD19<'+>IgD<'+>)數量沒有減少，說明MRL-lpr小鼠OBF-1缺失不影響B(tài)細胞的發(fā)育。OBF-1<'-/->MRL-lpr小鼠脾臟和淋巴結中CD3