海南島胡椒病原根結(jié)線蟲(chóng)鑒定及化學(xué)防治初步研究.pdf

1、根結(jié)線蟲(chóng)(Meloidogyne)是一類(lèi)世界性的植物病原物，可對(duì)農(nóng)作物造成嚴(yán)重危害。胡椒是重要的熱帶香辛作物，具有很高藥用價(jià)值，能治療多種疾病，現(xiàn)已發(fā)展為海南省一種重要的出口創(chuàng)匯農(nóng)產(chǎn)品(常英偉等，2005)。但其產(chǎn)量和品質(zhì)受到了根結(jié)線蟲(chóng)病的嚴(yán)重制約，染病植株地上部生長(zhǎng)停滯,節(jié)間變短，葉片褪綠黃化，落花落果，甚至整株死亡，造成較大的經(jīng)濟(jì)損失，尤其以幼齡胡椒受害最為嚴(yán)重。胡椒根結(jié)線蟲(chóng)世代重疊，因此可常年侵染寄主。海南是我國(guó)胡椒的主產(chǎn)區(qū)，胡椒

2、園以沙質(zhì)土壤為主，適合根結(jié)線蟲(chóng)的生長(zhǎng)，根結(jié)線蟲(chóng)病的株發(fā)病率在80％以上。至今尚未見(jiàn)對(duì)胡椒病原根結(jié)線蟲(chóng)系統(tǒng)研究的報(bào)道。 利用線蟲(chóng)的比較形態(tài)學(xué)、同工酶技術(shù)和分子標(biāo)記相結(jié)合的方法對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)進(jìn)行分類(lèi)鑒定是目前世界上比較先進(jìn)的方法，它在分類(lèi)的客觀性和準(zhǔn)確性已得到國(guó)際上的公認(rèn)。本研究利用形態(tài)學(xué)、同工酶分析及線粒體DNA標(biāo)記相結(jié)合的方法，對(duì)海南島胡椒病原根結(jié)線蟲(chóng)種類(lèi)進(jìn)行了系統(tǒng)鑒定。 廣泛調(diào)查了海南島12市縣主要胡椒產(chǎn)區(qū)的根結(jié)線蟲(chóng)病發(fā)病

3、情況，并有代表性地采集病原根結(jié)線蟲(chóng)樣本27份。線蟲(chóng)樣本接種于預(yù)先培植于消毒土的感病番茄或馬鈴薯根部進(jìn)行病原根結(jié)線蟲(chóng)原始種群的保存培養(yǎng)；挑取單卵塊將其寄生于番茄根部進(jìn)行純化，培養(yǎng)50天左右至根結(jié)線蟲(chóng)在寄主上產(chǎn)生根結(jié)。制作病原根結(jié)線蟲(chóng)及其會(huì)陰花紋的臨時(shí)和永久玻片對(duì)其主要形態(tài)特征進(jìn)行觀察和描述。取經(jīng)純化培養(yǎng)的根結(jié)在解剖鏡下分離雌蟲(chóng)，提取同工酶進(jìn)行酯酶(EST)和蘋(píng)果酸脫氫酶(MDH)電泳圖譜分析，參照Esbenshade等(1985，1990

4、)對(duì)酯酶和蘋(píng)果酸脫氫酶的電泳帶表型，初步確定侵染海南島胡椒的根結(jié)線蟲(chóng)有2種，即南方根結(jié)線蟲(chóng)(M.incognita)和花生根結(jié)線蟲(chóng)(M.arenaria)。 取經(jīng)純化培養(yǎng)的根結(jié)線蟲(chóng)卵塊孵化二齡幼蟲(chóng)，離心后得沉淀塊，用蛋白酶K法提取病原根結(jié)線蟲(chóng)mtDNA;利用Power等(1993)設(shè)計(jì)的引物＃C2F3和＃1188對(duì)mtDNA上COⅡ和LrRNA基因間的序列進(jìn)行擴(kuò)增和電泳分析，結(jié)果得到26個(gè)大小為1.7kb擴(kuò)增片段的種群，1個(gè)為1

5、.1kb擴(kuò)增片段的種群。根據(jù)廖金鈴(廖金鈴博士論文，2001)等的報(bào)道，片段長(zhǎng)度為1.7kb的為南方根結(jié)線蟲(chóng)，片段長(zhǎng)度為1.1kb的為花生根結(jié)線蟲(chóng)。綜合形態(tài)學(xué)和同工酶鑒定結(jié)果，斷定危害海南島胡椒的根結(jié)線蟲(chóng)是南方根結(jié)線蟲(chóng)和花生根結(jié)線蟲(chóng)，南方根結(jié)線蟲(chóng)是優(yōu)勢(shì)種群，占鑒定總數(shù)的96.3％。此結(jié)果為植物線蟲(chóng)學(xué)研究增添了新內(nèi)容，也為今后開(kāi)展胡椒根結(jié)線蟲(chóng)病的抗病種質(zhì)篩選、抗病育種和綜合防治提供了重要理論依據(jù)。 本研究選用6種常用殺線劑對(duì)胡椒根