三葉青根結(jié)線蟲鑒定及紫背天葵對南方根結(jié)線蟲的抗性機制研究.pdf

1、根結(jié)線蟲主要分布在熱帶和亞熱帶地區(qū)及設(shè)施栽培中，通過口針穿刺植物細(xì)胞，注射由食道腺分泌的致病因子，除了正常的（反復(fù)）侵染之外還會同其他病原物發(fā)生復(fù)合侵染。長期以來，由于化學(xué)殺線蟲劑的濫用，引起了害蟲的抗藥性及對環(huán)境污染等諸多問題，明確病原線蟲的種類、篩選抗性的植物材料等系根結(jié)線蟲病治理的重要舉措。
　　本研究在實驗室植物的根結(jié)線蟲抗性鑒定實驗的基礎(chǔ)之上，對來自三葉青上的一根結(jié)線蟲進(jìn)行了形態(tài)學(xué)和分子鑒定，系統(tǒng)研究了紫背天葵對南方根結(jié)

2、線蟲的抗性特點及抗性機制，主要研究結(jié)果概述如下:
　　1、結(jié)合形態(tài)學(xué)和分子特征，對來自三葉青根部病的病原線蟲進(jìn)行了鑒定。實驗對J2及成熟雌蟲的陰花紋分別進(jìn)行了形態(tài)學(xué)觀察和相關(guān)主要形態(tài)值的測量，有關(guān)的主要形態(tài)學(xué)特征和形態(tài)測量值與南方根結(jié)線蟲基本吻合;通過對rDNA的ITS區(qū)、28s的D2A/D3B區(qū)的擴增和序列比較，有關(guān)序列與南方根結(jié)線蟲的同源性較高，達(dá)到99％和99％的相似度，利用南方根結(jié)線蟲特異性SCAR引物MiF/R的PCR反

3、應(yīng)也獲得了陽性結(jié)果;綜合形態(tài)學(xué)和分子特征確定來自三葉青上的根結(jié)線蟲為南方根結(jié)線蟲(M.incongnita)，這也是首次報道三葉青受南方根結(jié)線蟲的侵染和危害，證明三葉青是南方根結(jié)線蟲的新寄主。
　　2、探索優(yōu)化了紫背天葵扦插繁殖的方法并采用1月齡苗作為實驗材料;利用酸性品紅和苔酚蘭染色方法著重研究了南方根結(jié)線蟲在紫背天葵根內(nèi)的侵染和發(fā)育狀況，在J2接種量(1.46*104)條件下觀察了接種根結(jié)線蟲后紫背天葵根和根結(jié)線蟲的聯(lián)合發(fā)育情

4、況。線蟲在12dpi開始相對大規(guī)模的入侵，0％-0.1％的入侵率，在18dpi和27dpi時根內(nèi)線蟲數(shù)目相對較多，35dpi時已經(jīng)大為減少;27dpi到35dpi之間就出現(xiàn)了接近60％的線蟲消亡，在整個過程中并沒有齡期超過J3的線蟲被檢測到，伴隨著線蟲的入侵，植物根的維管束組織也發(fā)生著分蘗、沉積加厚和碎塊化等異化過程;
　　3、設(shè)計了一系列引物并利用多種PCR技術(shù)驗證了獲得了一對高效的簡并引物，擴增獲得了紫背天葵的NBS-LRR抗