產(chǎn)纖維素酶菌的誘變育種及產(chǎn)酶特性研究.pdf

1、在目前對于纖維素物質(zhì)生物轉(zhuǎn)化利用的研究中，主要涉及纖維素降解微生物資源的開發(fā)，纖維素酶活性的提高以及優(yōu)化工藝參數(shù)等熱點問題。因此，獲得高效纖維素分解菌，優(yōu)化纖維素酶的發(fā)酵條件，提高酒精產(chǎn)率，降低燃料酒精生產(chǎn)的成本，對于合理利用資源，降低環(huán)境污染具有極其重要的意義。
　　本研究針對纖維素類物質(zhì)生物利用的熱點問題，以本實驗室分離篩選的纖維素降解菌FLZ6和FLZ10為研究對象，分別從誘變選育高纖維素酶活性的降解菌、優(yōu)化產(chǎn)酶條件、纖維素

2、酶組分分析及酶學(xué)性質(zhì)研究角度進行了研究和討論。
　　根據(jù)形態(tài)學(xué)和微生物細(xì)胞膜脂肪酸特異性分析，鑒定FLZ6為地衣形芽孢桿菌(Bacillus-licheniformis)，F(xiàn)LZ10為毛殼菌(Chaetomium spp）。經(jīng)紫外誘變育種，獲得155株FLZ6的突變株和137株FLZ10的突變株，其正突變率分別為18.7％和23.6%；以菌株在剛果紅培養(yǎng)基上降解圈與菌落直徑的比值(H/d)和纖維素酶活為指標(biāo)，選育正突變株；經(jīng)連續(xù)傳

3、代培養(yǎng)，獲得遺傳穩(wěn)定性較好FLZ6的正突變株C6-4和FLZ10的正突變株M6。誘變株C6-4的CMC、FP酶活分別為18.6U和16.4U，比出發(fā)菌株FLZ6相比酶活分別提高21.5%和28.3%；突變株M6的CMC、FP酶活分別為62.6U和59.1U，比出發(fā)菌株FLZ10相比酶活分別提高24.7%和37.1%。
　　為獲得高酶活，對固體發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基成分和環(huán)境因子進行優(yōu)化，得到最適產(chǎn)酶培養(yǎng)條件：對C6-4菌株，最佳混合碳源秸

4、稈/麩皮添加比例為8:2，最佳氮源為，氮源的最佳添加量為3%，最佳接種量15%，最適產(chǎn)酶溫度為40℃，最適pH6.0，最適發(fā)酵時間為3天，與原始菌株FLZ6相比，其FP酶活提高了49.1%；對M6菌株，最佳混合碳源秸稈/麩皮添加比例為7:3，最佳氮源為(NH4)2HPO4，(NH4)2HPO4的最佳添加量為3%，最佳接種量10%，最適產(chǎn)酶溫度為40℃，最適pH5.5，最適發(fā)酵時間為3天，與原始菌株FLZ6相比，其FP酶活提高了54.5%

5、。
　　通過SDS-PAGE電泳對C6-4和M6進行特異性酶蛋白組分分析，得出以下結(jié)論：C6-4具有9種蛋白質(zhì)，與原始菌株FLZ6相比，增加一條蛋白質(zhì)條帶，其增加的條帶酶分子量為40.7KD，在63.4KD處酶蛋白含量有所減少，但在34.8KD和40.0KD處蛋白質(zhì)含量有所增加；M6具有12種蛋白質(zhì)，與原始菌株FLZ10相對，增加一條蛋白質(zhì)條帶，其增加的酶分子量為68.1KD，在92.0KD處酶蛋白含量有所減少，但在97.4KD處