植物寄生線蟲生防真菌篩選及鑒定.pdf

1、生物防治是植物寄生線蟲防治的研究熱點，生防真菌篩選及活性驗證是其中重要的一個環(huán)節(jié)。本研究在前期研究的基礎(chǔ)上，系統(tǒng)的研究了生防真菌的篩選體系、活性驗證、高活性菌株發(fā)酵時間和發(fā)酵液稀釋倍數(shù)優(yōu)化以及生防菌株的種類鑒定，包括根結(jié)線蟲卵表面消毒的方法、獲取高孵化率根結(jié)線蟲卵的最佳取樣時間、供試生防真菌對南方根結(jié)線蟲（Meloidogyne incongnita）、松材線蟲（Bursaphelenchus xylophilus）、大豆孢囊線蟲（He

2、terodera glycines）毒殺活性的室內(nèi)篩選、生防菌株XN-2、XO-2、CLR-3、CQE-4和FCE-2處理線蟲卵或J2后的侵染能力和繁殖能力的室內(nèi)盆栽試驗、生防菌株XN-2、XO-2、CLR-3、CQE-4和 FCE-2殺線活性最佳發(fā)酵條件的優(yōu)化，以及具有生防潛力9株真菌的形態(tài)學(xué)和分子生物鑒定。具體研究結(jié)果如下：
　　1.建立植物寄生線蟲生防真菌篩選體系，并篩選出對根結(jié)線蟲、松材線蟲和大豆孢囊線蟲有作用的生防菌株。

3、
　　利用70％酒精對根結(jié)線蟲卵表面消毒，消毒徹底，其孵化率與無菌水對照相比沒有顯著差異（P<0.05）。根結(jié)線蟲卵最佳取樣時間為在接種線蟲卵后第28 d至38 d之間。
　　研究發(fā)現(xiàn)， XO-2和 CLR-3菌株發(fā)酵液對根結(jié)線蟲卵孵化率有明顯的抑制作用， XN-2、FCH-1、CLK-2、FCD-2、CLS-2、CLR-1和XS-5菌株處理根結(jié)線蟲卵孵化率顯著低于無菌水對照（P<0.05）。
　　XO-2菌株發(fā)酵液顯

4、著抑制大豆孢囊線蟲卵孵化（P<0.05）， FCD-2、CLS-2、CLR-1、FCH-1、CLK-2、XI和 CLR-3菌株發(fā)酵液處理的卵孵化率均顯著低于無菌水對照（P<0.05）。
　　CLQ-3、CLV-2、XN-2、CQE-4、CLK-2和FCE-2菌株發(fā)酵液10倍稀釋液處理根結(jié)線蟲J272 h擊倒率均高于90%，其中XN-2和FCE-2在處理72 h后J2的死亡率均為100%，且FCE-2菌株發(fā)酵液處理24 h后J2全部

5、死亡。
　　菌株FCC-4、CLV-2、XI、XN-2、CQE-4、CLK-2和XK-1的發(fā)酵液2倍稀釋液處理松材線蟲72 h被全部擊倒，其中XN-2和CQE-4兩個菌株處理死亡率達(dá)到100%， FCC-4、CLV-2、XI、CLK-2和XK-1菌株處理死亡率分別為98.81%、87.53%、97.82%、98.41%和88.07%；稀釋5倍條件下XI、XN-2、CQE-4和CLK-2菌株處理72 h對松材線蟲擊倒率均達(dá)100%，

6、且死亡率均高于90%；稀釋10倍條件下，僅XI、CLK-2和XN-23個菌株對松材線蟲有較高的毒殺活性，分別為91.53%、93.73%和76.05%。
　　2.生防菌株發(fā)酵液活性的盆栽驗證
　　研究結(jié)果表明，XN-2和 XO-2兩個菌株發(fā)酵液對根結(jié)線蟲卵孵化抑制效果較好，根結(jié)數(shù)量和卵粒數(shù)均顯著低于無菌水對照，且對番茄植株生長沒有影響。CQE-4菌株對根結(jié)線蟲J2毒殺效果最好，根結(jié)數(shù)平均為2.3個，均顯著低于無菌水對照（P<

7、0.05），其次是FCE-2菌株。
　　3.生防菌株對根結(jié)線蟲卵孵化抑制和J2毒殺活性的發(fā)酵時間和發(fā)酵液稀釋倍數(shù)優(yōu)化
　　將上述篩選中對根結(jié)線蟲作用效果明顯的5個菌株進(jìn)行發(fā)酵時間和發(fā)酵液稀釋倍數(shù)優(yōu)化，試驗結(jié)果表明，XO-2和XN-2菌株發(fā)酵2周發(fā)酵液根結(jié)線蟲卵孵化率低于發(fā)酵1周和3周發(fā)酵液，XO-2菌株發(fā)酵液處理中死亡的卵和J260%出現(xiàn)蟲體被降解的現(xiàn)象。CLR-3菌株在發(fā)酵1周時，5倍、10倍和20倍稀釋液根結(jié)線蟲卵孵化率

8、均低于10%，顯著低于無菌水對照（P<0.05），但在2倍稀釋液下孵化率為53.67%，稀釋30倍和40倍發(fā)酵液處理的卵孵化率分別為18.71%和34.66%，顯著低于無菌水對照（P<0.05），高濃度下抑制率降低，這種現(xiàn)象有待進(jìn)一步研究證實。
　　XN-2菌株發(fā)酵液在發(fā)酵1周和2周時，高濃度（2倍、5倍和10倍稀釋液）下對線蟲毒殺活性均為100%，發(fā)酵1周和2周時20倍稀釋液處理根結(jié)線蟲J2死亡率分別為90.54%和99.56%

9、，顯著高于發(fā)酵3周發(fā)酵液56.16%（P<0.05）。發(fā)酵3周時10倍稀釋液死亡率為96.03%；CQE-4在發(fā)酵2周和3周時，2倍、5倍、10倍和20倍稀釋液處理72 h死亡率均達(dá)到100%，均顯著高于發(fā)酵1周死亡率（P<0.05）。FCE-2菌株發(fā)酵后在4℃處理4周對線蟲有更好毒殺作用，發(fā)酵3周毒殺效果優(yōu)于發(fā)酵1周和2周發(fā)酵液，且在發(fā)酵3周時，2倍稀釋處理2h后線蟲即被全部擊倒并死亡，6h部分線蟲的蟲體被降解，12 h時線蟲的蟲體均

10、出現(xiàn)降解，2倍、5倍和10倍稀釋液處理12 h線蟲死亡率均達(dá)到100%，發(fā)酵3周的發(fā)酵液2倍、5倍和10倍對線蟲有降解作用，稀釋倍數(shù)大于20倍對線蟲毒殺作用減弱。
　　4.生防菌株的種類鑒定
　　結(jié)合各菌株的形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定， CLR-1鑒定為哈茨木霉（ Trichoderma harzianum），CLR-3和XI均被鑒定為微紫青霉菌（Penicillium janthinellum），CLS-2鑒定為哈茨木霉（ T