纖溶系統(tǒng)的調(diào)控及溶栓劑的分子生物學(xué)研究.pdf

1、血栓性疾病,尤其是急性心肌梗塞(AMI)和缺血性腦梗塞嚴(yán)重威脅著人類的健康,是人類致死、致殘的首要原因.在發(fā)生AMI后盡早應(yīng)用溶栓劑進(jìn)行治療,能顯著降低AMI死亡率,改善預(yù)后.但是,現(xiàn)有的溶栓劑還存在著多種缺陷,如出血、缺血心肌沒有明顯的再灌注,以及溶栓治療性再梗塞.因而對(duì)纖溶系統(tǒng)及其調(diào)節(jié)機(jī)制的研究,以及對(duì)高效、安全、方便的溶栓劑的研制具有重要作用,是該領(lǐng)域的研究重點(diǎn).該文圍繞纖溶系統(tǒng)的調(diào)控機(jī)制和溶栓劑DSPA進(jìn)行了一系列研究.首先利用

2、大鼠肺纖維蛋白沉積模型,研究PAI-1和TAFIa對(duì)纖溶的調(diào)控作用;再從分子生物學(xué)及生物化學(xué)的角度探討新型纖溶劑DSPA(Desmodus rotundus salivary plasminogen activator)的作用機(jī)制;最后研制P-selectin導(dǎo)向的DSPA,試圖得到一個(gè)更好的溶栓劑.新鮮動(dòng)脈血栓主要由活化血小板和纖維蛋白組成,而陳舊性止血血栓主要由纖維蛋白組成.P-selectin是活化血小板的標(biāo)志物,是新鮮動(dòng)脈血栓導(dǎo)

3、向的良好靶抗原.該室于1989年研制了抗活化血小板表面P-selectin的單克隆抗體SZ51,研究顯示它具有很好的血栓顯像效果.另外,SZ51導(dǎo)向的單鏈uPA(SZ51sucPA)在體內(nèi)外溶栓實(shí)驗(yàn)中也顯示出比uPA更好的溶栓作用.為研制P-selectin導(dǎo)向的DSPA,我們構(gòu)建了全長SZ51-DSPA、SZ51Fab'-DSPA和SZ51scFv-DSPA的表達(dá)載體,并根據(jù)它們所表達(dá)的融合蛋白的抗原結(jié)合特性和溶栓能力,從中選出SZ5

4、1-DSPA作進(jìn)一步研究;建立了4株高效表達(dá)SZ51-DSPA(>3ug/ml)的穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株;經(jīng)protein A親和柱和凝膠柱分離后得到了純化的融合蛋白;純化的SZ51-DSPA與SZ51抗體具有相同的抗原結(jié)合特異性,兩者的kd值類似.體外溶栓實(shí)驗(yàn)顯示SZ51-DSPA與DSPA具有同等的溶栓作用.這些結(jié)果顯示,我們成功地研制了P-selectin導(dǎo)向的DSPA,它保留了SZ51的抗原結(jié)合特性和DSPA溶栓功能.下一步我們將采用狗