p53反義核酸個(gè)體性治療乳腺癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究突變型p53外顯子8反義RNA(ASp53exon8'RNA)和野生型p53基因(WT-p53)共同轉(zhuǎn)染對(duì)人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231(含突變型p53外顯子8)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制、誘導(dǎo)凋亡及突變p53蛋白表達(dá)的阻斷作用，研究針對(duì)突變型p53進(jìn)行體外雙重基因治療的效果。 方法：在脂質(zhì)體介導(dǎo)下向人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231(含突變型p53外顯子8)中轉(zhuǎn)染含野生型p53cDNA(WT-p53)的質(zhì)粒pC53-SN3，用

2、G418篩選穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞克隆(WTp53-231細(xì)胞)；以含MDA-MB-231細(xì)胞中突變p53外顯子8的反義表達(dá)載體為模板，體外轉(zhuǎn)錄制備突變p53反義RNA單鏈分子，利用脂質(zhì)體介導(dǎo)反義RNA轉(zhuǎn)染W(wǎng)Tp53-231細(xì)胞；繪制轉(zhuǎn)染后細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，并計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率，測(cè)定MTT吸收值以觀察轉(zhuǎn)染細(xì)胞的代謝水平；TUNEL法檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的凋亡狀態(tài)，免疫組化檢測(cè)反義拯救法抑制突變型p53表達(dá)的效果。結(jié)果：1、以脂質(zhì)體為介導(dǎo)用質(zhì)粒pC53-SN

3、3轉(zhuǎn)染人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231，經(jīng)G418篩選獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞WTp53-231細(xì)胞。 2、基因工程產(chǎn)物ASp53exon8'RNA通過(guò)脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染W(wǎng)Tp53-231細(xì)胞，引起(1)腫瘤細(xì)胞系增殖能力下降，生長(zhǎng)趨勢(shì)明顯緩慢，而且在轉(zhuǎn)染后48h時(shí)生長(zhǎng)抑制率最高。(2)轉(zhuǎn)染48h后MTT吸收值明顯下降，顯示細(xì)胞代謝受到抑制，活力下降。(3)轉(zhuǎn)染48h后TUNEL原位凋亡檢測(cè)顯示雙重基因治療可大大提高腫瘤細(xì)胞的凋亡指數(shù)。(