水稻Dicer-Like5突變體的基因定位.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)在對(duì)水稻品種001進(jìn)行甲基磺酸乙酯（EMS）化學(xué)誘導(dǎo)后，在其后代中出現(xiàn)DCL5突變體植株。該植株表現(xiàn)為外稃部分退化或完全退化為芒狀，與DCL4相似，但是與DCL4不相同的是DCL5外稃下部卷曲成回形針；各輪花器官發(fā)育退化，雄蕊發(fā)育不良，不能正常結(jié)實(shí)。這種現(xiàn)象不能完全由花器官發(fā)育的ABC模型來解釋，也不能由DCL4 siRNA來解釋。
　　為了確定該突變性狀的遺傳學(xué)規(guī)律，將DC L5突變體與大粒香進(jìn)行了正反雜交，在F1代中，發(fā)

2、現(xiàn)后代植株均表現(xiàn)為野生型性狀，說明該突變性狀是由隱性基因控制；在F2代群體中出現(xiàn)了性狀的分離，且野生型植株與DCL5突變型植株的分離比率經(jīng)卡方檢驗(yàn)，符合孟德爾3:1的隱性單基因遺傳規(guī)律，由此表明DCL5突變性狀是由一對(duì)隱性單基因控制。
　　DCL5基因定位群體來源于DCL5突變雜合體×大粒香，基因定位采用的是SSR分子標(biāo)記。先用400對(duì)分子標(biāo)記分析親本大粒香與DCL5突變植株之間的多態(tài)性，有22對(duì)表現(xiàn)多態(tài)性的引物，再用22對(duì)多態(tài)性

3、的引物與10個(gè)正常單株，10個(gè)突變單株作連鎖驗(yàn)證，與目標(biāo)位點(diǎn)連鎖的引物用于分析定位群體中的DC L5突變植株，作進(jìn)一步驗(yàn)證。初步定位目的基因從F2分離群體中獲得144株突變單株，將目的基因定位在第三染色體短臂上，SSR分子標(biāo)記RM6266位于目的基因下部，與目的基因的遺傳距離為17.7cM。精細(xì)定位群體來自DCL5突變雜合體×大粒香的自交群體，共獲得1999株DCL5突變單株，SSR分子標(biāo)記RM15316、RM5488與RM6266位于