HGF基因治療乙酸誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：評價(jià)攜帶肝細(xì)胞生長因子(HGF)基因的減毒沙門氏菌對大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型的治療作用. 方法：第一部分乙酸誘導(dǎo)建立40只Wistar大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型，并隨機(jī)分成四組：TypL-HGF治療組(A組)，TypL-GFP治療組(B組)，Ty治療組(C組)模型對照組(D組)，另設(shè)一組正常對照組(E組)，每組10只。造摸后第3d開始灌腸治療，A組給予1×109cfu Typl-HGF治療，B組給予同劑量聊Typl-GFP治療，C組

2、給予同劑量Ty治療，D、E組分別給予同體積的生理鹽水灌腸，每3d一次，共3次。各組大鼠于造模后第12d斷頭處死，取結(jié)腸病變部位組織行常規(guī)HE染色，觀察各實(shí)驗(yàn)組結(jié)腸的病理變化，并收集全血及血清，流式細(xì)胞儀檢測全血中CD4+，CD8+T細(xì)胞含量，放免法檢測血清中IL-2、IL-6、TNF-a水平的變化。 第二部分用免疫組化法檢測各組HGF及c-Met基因的表達(dá)；熒光顯微鏡觀察GFP基因在B組大鼠各臟器的表達(dá)；PCR法檢測A組大鼠心、

3、肝、脾、腎、胃、大腸等組織中CMV的表達(dá)。 結(jié)果： 1.肉眼觀察可見B、C、D組大鼠腸管不同程度變粗，腸壁變薄，腸壁外周粘連嚴(yán)重，黏膜潰瘍、糜爛嚴(yán)重，A組大鼠上述病變明顯改善(P<0.01)；光鏡下可見B、C、D組大鼠結(jié)腸潰瘍形成較多，黏膜糜爛缺失嚴(yán)重，腺體破壞，壞死組織多見，黏膜肌層破壞，漿膜充血水腫，A組大鼠結(jié)腸潰瘍數(shù)較B、C、D組減少，黏膜糜爛缺失程度輕，潰瘍邊可見新生肉芽組織增生，有的甚至黏膜已修復(fù)(P<0.05)。全血

4、中CO4+/CD8+比值及血清IL-2、IL-6、TNF-a水平A組明顯低于C，D組(P<0.05)。 2.免疫組化顯示：A組大鼠結(jié)腸組織中HGF及c-Met基因的表達(dá)均強(qiáng)于其他組。 3.B組大鼠的肝臟，脾臟，腎臟，大腸，小腸中均可檢測到綠色熒光蛋白的表達(dá)。 4.A組大鼠心、肝、脾、腎、胃、大腸等組織提取DNA中可擴(kuò)增出CMV片段。 結(jié)論：1減毒沙門氏菌可以將HGF基因攜帶入大鼠體內(nèi)表達(dá)。 2減毒