副豬嗜血桿菌分型血清的制備及四川地區(qū)血清流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、副豬嗜血桿菌病是由副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis，HPS）引起豬的一種接觸性細菌性傳染病，嚴重威脅著養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展。長期以來，HPS血清型復(fù)雜，分型血清制備較困難，方法不標(biāo)準，為有利于本病的病原學(xué)診斷，本試驗采用HPS的15個血清型標(biāo)準菌株制備免疫原免疫健康雄性家兔，成功制備HPS分型血清，并選用瓊脂擴散試驗對四川地區(qū)HPS田間分離株進行血清型鑒定，旨在從病原學(xué)角度對四川地區(qū)HPS優(yōu)勢血清型的流行情況以及血清型

2、的分布規(guī)律進行調(diào)查，為四川地區(qū)該病的針對性防控提供科學(xué)依據(jù)。
　　1.HPS分型血清制備的免疫程序的優(yōu)化篩選
　　從澳大利亞昆士蘭州動物研究所購買HPS的15個血清型的標(biāo)準菌株，對標(biāo)準菌株進行復(fù)蘇與鑒定，進一步證實標(biāo)準菌株的準確性，為分型血清的制備奠定基礎(chǔ)。通過對本實驗室原有免疫程序進行優(yōu)化，優(yōu)化后的免疫程序提高了菌液免疫次數(shù)，縮短了免疫間隔時間，降低了免疫劑量，同時基礎(chǔ)免疫之前增加了免疫誘導(dǎo)。采用優(yōu)化后的免疫程序進行HPS

3、5型分型血清的制備，同時以文獻報道的3種不同的免疫程序作為對照組，免疫結(jié)束后心臟采血，并分離血清，對血清采用瓊脂擴散試驗進行特異性檢測，采用IHA試劑盒進行抗體效價檢測。結(jié)果表明:血清特異性良好，試驗組與對照組家兔血清通過瓊脂擴散試驗均能產(chǎn)生明顯沉淀線，空白對照組瓊脂擴散試驗未產(chǎn)生沉淀線，并且試驗組血清抗體效價達1∶32，均高于3個對照組，因此，優(yōu)化后的免疫程序可推廣用于HPS其它血清型分型血清的制備。
　　2.HPS分型血清的制

4、備及其臨床應(yīng)用
　　利用HPS的15個血清型的標(biāo)準菌株制備免疫原，采用優(yōu)化后的免疫程序通過皮下注射與耳緣靜脈注射免疫原的方式免疫健康雄性家兔，免疫結(jié)束后采集心血并分離血清，對血清進行特異性與抗體效價檢測，結(jié)果表明血清特異性良好，抗體效價均達到1∶8以上，用于HPS田間分離菌株的血清型鑒定取得良好效果。本實驗室2013年至2014年，從四川22個市區(qū)80個豬場中共采集498份病料，從這些病料中共分離出80株HPS。采用瓊脂擴散試驗對