副豬嗜血桿菌分型血清的制備及四川地區(qū)血清流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、副豬嗜血桿菌病是由副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis，HPS）引起豬的一種接觸性細(xì)菌性傳染病，嚴(yán)重威脅著養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展。長(zhǎng)期以來，HPS血清型復(fù)雜，分型血清制備較困難，方法不標(biāo)準(zhǔn)，為有利于本病的病原學(xué)診斷，本試驗(yàn)采用HPS的15個(gè)血清型標(biāo)準(zhǔn)菌株制備免疫原免疫健康雄性家兔，成功制備HPS分型血清，并選用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)對(duì)四川地區(qū)HPS田間分離株進(jìn)行血清型鑒定，旨在從病原學(xué)角度對(duì)四川地區(qū)HPS優(yōu)勢(shì)血清型的流行情況以及血清型

2、的分布規(guī)律進(jìn)行調(diào)查，為四川地區(qū)該病的針對(duì)性防控提供科學(xué)依據(jù)。
　　1.HPS分型血清制備的免疫程序的優(yōu)化篩選
　　從澳大利亞昆士蘭州動(dòng)物研究所購(gòu)買HPS的15個(gè)血清型的標(biāo)準(zhǔn)菌株，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行復(fù)蘇與鑒定，進(jìn)一步證實(shí)標(biāo)準(zhǔn)菌株的準(zhǔn)確性，為分型血清的制備奠定基礎(chǔ)。通過對(duì)本實(shí)驗(yàn)室原有免疫程序進(jìn)行優(yōu)化，優(yōu)化后的免疫程序提高了菌液免疫次數(shù)，縮短了免疫間隔時(shí)間，降低了免疫劑量，同時(shí)基礎(chǔ)免疫之前增加了免疫誘導(dǎo)。采用優(yōu)化后的免疫程序進(jìn)行HPS

3、5型分型血清的制備，同時(shí)以文獻(xiàn)報(bào)道的3種不同的免疫程序作為對(duì)照組，免疫結(jié)束后心臟采血，并分離血清，對(duì)血清采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)進(jìn)行特異性檢測(cè)，采用IHA試劑盒進(jìn)行抗體效價(jià)檢測(cè)。結(jié)果表明:血清特異性良好，試驗(yàn)組與對(duì)照組家兔血清通過瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)均能產(chǎn)生明顯沉淀線，空白對(duì)照組瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)未產(chǎn)生沉淀線，并且試驗(yàn)組血清抗體效價(jià)達(dá)1∶32，均高于3個(gè)對(duì)照組，因此，優(yōu)化后的免疫程序可推廣用于HPS其它血清型分型血清的制備。
　　2.HPS分型血清的制

4、備及其臨床應(yīng)用
　　利用HPS的15個(gè)血清型的標(biāo)準(zhǔn)菌株制備免疫原，采用優(yōu)化后的免疫程序通過皮下注射與耳緣靜脈注射免疫原的方式免疫健康雄性家兔，免疫結(jié)束后采集心血并分離血清，對(duì)血清進(jìn)行特異性與抗體效價(jià)檢測(cè)，結(jié)果表明血清特異性良好，抗體效價(jià)均達(dá)到1∶8以上，用于HPS田間分離菌株的血清型鑒定取得良好效果。本實(shí)驗(yàn)室2013年至2014年，從四川22個(gè)市區(qū)80個(gè)豬場(chǎng)中共采集498份病料，從這些病料中共分離出80株HPS。采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)對(duì)