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文檔簡介
1、目的:觀察促進(jìn)γ-氨基丁酸(gamma.aminobutyric acid,GABA)釋放的Estazolam對結(jié)節(jié)乳頭體核組胺(histamine,HA)引發(fā)的覺醒的作用,探究下丘腦后部HA與GABA能神經(jīng)元對睡眠一覺醒周期的調(diào)節(jié)。 方法:雄性SD大鼠隨機(jī)分為5組:對照組(n=6),生理鹽水組(n=6),Estazolam組(n=6),Histamine dihydrochlofide組(HA組,n=6),HA+Estazol
2、am組(n=6)。在無菌手術(shù)室,戊巴比妥鈉(30 mg·kg-1Sigma)腹腔注射麻醉,頭部固定于腦立體定位儀(NARISHIGE,SR-6R,Tokyo,Japan)上,暴露顱骨,H2O2清潔顱骨表面,4個(gè)EEG電極(直徑2 mm)植入顱骨,分別位于矢狀縫兩側(cè)]mm與冠狀縫前1 mm交點(diǎn),矢狀縫兩側(cè)1mm與人字縫前1 mm交點(diǎn),深度到達(dá)接觸硬腦膜,用于記錄皮層腦電EEG。2根銀絲電極植入雙側(cè)頸肌內(nèi)用于記錄肌電活動(dòng)EMG。將EEG和E
3、MG電極通過導(dǎo)線連接到微型插座(Pedestal Socket,F(xiàn)rance),以備EEG和EMG記錄使用。帶芯的不銹鋼導(dǎo)管(外徑0.06 mm)參照Paxinos G and Wstson C大鼠立體定位圖譜(1986)植入腦內(nèi)(AP-4.2,ML±1.3,DV-7.4),使微量注射藥物時(shí)注射針頭可達(dá)TMn(DV-9.4)。常規(guī)消毒,微型插座和引導(dǎo)管均用牙科水泥固定于大鼠顱骨上。 術(shù)后恢復(fù)7天,大鼠在記錄倉飼養(yǎng)以恢復(fù)和適應(yīng)環(huán)境
4、。對照組記錄正常狀態(tài)下24 h的EEG和EMG。注射藥物組,藥物在使用前經(jīng)生理鹽水配制成所需濃度,經(jīng)導(dǎo)管微量注射入TMn,生理鹽水組注射等量生理鹽水0.5/μL,HA組注射HA(1μg·kg-1,Sigma),Estazolam組口服Estazolam(5 μg·kg-1,Sigma),每一組均是8:00 am記錄,10:00 am給藥。HA+Estazolam組8:00 am記錄,10:00 am注射HA(1μg·kg-1,Sigma
5、),12:00 anl給予口服Estazolam(5 μg·kg-1,Sigma)。同步的EEG/EMG信號(hào)通過微型插座連接到多導(dǎo)睡眠記錄儀(EEG-5208,NihonKohon Corporation,Tokyo,Japan)記錄,輸出信號(hào)經(jīng)CED microl401 mkⅡ(CED,Cambridge,UK)和生命科學(xué)數(shù)據(jù)采集與分析系統(tǒng)Spike2(CED,Cambridge,UK)采集和分析各組藥物對于睡眠.覺醒周期中各時(shí)相的調(diào)
6、節(jié)作用。每天8:00 am開始,連續(xù)記錄24小時(shí)同步的EEG/EMG。 結(jié)果:TMn內(nèi)注射生理鹽水,與對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TMn內(nèi)注射HA(1μg·kg-1),與對照組比較,在24小時(shí)中覺醒時(shí)間增加(P<0.01),慢波睡眠被抑制,但不影響異相睡眠??诜﨓stazolam(5 mg·kg-1),與對照組比較,總睡眠時(shí)間增加,其特征為深度慢波睡眠(SWS2)增加(P<0.01),淺度慢波睡眠減少,異相睡眠減少(P<0.01))
7、。 HA組在TMn缸內(nèi)注射HA(1μg·kg-1,Sigma)引發(fā)3個(gè)多小時(shí)的覺醒。HA+Estazolam組在HA給藥后2 h給予Estazolam(5 mg·kg-1,Sigma),完全反轉(zhuǎn)HA的作用,使覺醒時(shí)間明顯縮短(P<0.01),SWSl時(shí)間增加(P<0.01),SWS2時(shí)間增加(P<0.01),異相睡眠時(shí)間增加(P<0.01)。 結(jié)論:(1)TMn內(nèi)HA能神經(jīng)元可以促進(jìn)和維持覺醒,抑制慢波睡眠,而異相睡眠不
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