低酚陸地棉Jisheng-1再生體系建立及DREB1C轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)化.pdf

1、棉花是植株再生最困難的植物之一，棉花組織培養(yǎng)和細(xì)胞培養(yǎng)落后于其它作物。雖然近些年，棉花的體細(xì)胞組織培養(yǎng)己經(jīng)有了較大的發(fā)展，一些實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)基本上建立了陸地棉再生體系，但是大多集中在少數(shù)品種上，尤其是一些模式品種；并且仍然存在著許多尚未解決的問題，如再生品種少、胚狀體萌發(fā)率偏低、畸形苗率較高、再生周期長(zhǎng)等。本研究以生產(chǎn)上大面積推廣的低酚陸地棉Jisheng-1為實(shí)驗(yàn)材料，對(duì)其體細(xì)胞胚胎發(fā)生和植株再生體系進(jìn)行了研究。建立了高效的體細(xì)胞再生體系

2、，優(yōu)化了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的棉花DREBlC轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)化條件并獲得了轉(zhuǎn)化再生植株。主要結(jié)果如下： 1.建立了高效的體細(xì)胞再生體系。通過對(duì)低酚陸地棉Jisheng-1體細(xì)胞胚胎發(fā)生的一些參數(shù)進(jìn)行調(diào)整，優(yōu)化了再生體系。 對(duì)低酚陸地棉Jisheng-1不同外植體誘導(dǎo)愈傷組織的效果研究表明：棉花的下胚軸、胚根、子葉均可以作為外植體，但下胚軸最易誘導(dǎo)出愈傷組織且誘導(dǎo)量大。培養(yǎng)基激素組合IBA/KT誘導(dǎo)出的愈傷組織狀態(tài)最好，MSB固體培養(yǎng)

3、基中附加1.0mg/L IBA和0.5mg/LKT誘導(dǎo)出的愈傷在90天左右最先分化。分化培養(yǎng)基中去除NH4NO3，并增加KNO3，在本研究中未明顯提高愈傷組織胚分化率。在體細(xì)胞胚成熟和萌發(fā)培養(yǎng)基中加入1.0g/L谷氨酰胺和0.5g/L天門冬酰胺，能促進(jìn)Jisheng-1體細(xì)胞胚的成熟和萌發(fā)。 2.建立了以低酚陸地棉Jisheng-1胚性愈傷組織作為外植體的農(nóng)桿菌介導(dǎo)的DREBlC轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)化體系，并獲得了轉(zhuǎn)化再生植株。

4、 以Jisheng-1愈傷組織為外植體，對(duì)轉(zhuǎn)化體系的幾個(gè)重要參數(shù)，如預(yù)培養(yǎng)的有無，農(nóng)桿菌的菌液濃度，共培養(yǎng)溫度，共培養(yǎng)時(shí)間，潮霉素的篩選濃度進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果表明：預(yù)培養(yǎng)7天的胚性愈傷組織較適合農(nóng)桿菌侵染；農(nóng)桿菌在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期(OD600為0.4-0.6)進(jìn)行侵染較適宜；共培養(yǎng)溫度以20℃為適宜溫度；共培養(yǎng)時(shí)間以60h為適宜時(shí)間；潮霉素的濃度以25mg/L為宜。相對(duì)于大多數(shù)用下胚軸作外植體的轉(zhuǎn)化體系來說，轉(zhuǎn)化效率更高：在較短的時(shí)間內(nèi)可以獲得