低酚陸地棉Jisheng-1再生體系建立及DREB1C轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)化.pdf

1、棉花是植株再生最困難的植物之一，棉花組織培養(yǎng)和細胞培養(yǎng)落后于其它作物。雖然近些年，棉花的體細胞組織培養(yǎng)己經(jīng)有了較大的發(fā)展，一些實驗室已經(jīng)基本上建立了陸地棉再生體系，但是大多集中在少數(shù)品種上，尤其是一些模式品種；并且仍然存在著許多尚未解決的問題，如再生品種少、胚狀體萌發(fā)率偏低、畸形苗率較高、再生周期長等。本研究以生產(chǎn)上大面積推廣的低酚陸地棉Jisheng-1為實驗材料，對其體細胞胚胎發(fā)生和植株再生體系進行了研究。建立了高效的體細胞再生體系

2、，優(yōu)化了農(nóng)桿菌介導的棉花DREBlC轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)化條件并獲得了轉(zhuǎn)化再生植株。主要結(jié)果如下： 1.建立了高效的體細胞再生體系。通過對低酚陸地棉Jisheng-1體細胞胚胎發(fā)生的一些參數(shù)進行調(diào)整，優(yōu)化了再生體系。 對低酚陸地棉Jisheng-1不同外植體誘導愈傷組織的效果研究表明：棉花的下胚軸、胚根、子葉均可以作為外植體，但下胚軸最易誘導出愈傷組織且誘導量大。培養(yǎng)基激素組合IBA/KT誘導出的愈傷組織狀態(tài)最好，MSB固體培養(yǎng)

3、基中附加1.0mg/L IBA和0.5mg/LKT誘導出的愈傷在90天左右最先分化。分化培養(yǎng)基中去除NH4NO3，并增加KNO3，在本研究中未明顯提高愈傷組織胚分化率。在體細胞胚成熟和萌發(fā)培養(yǎng)基中加入1.0g/L谷氨酰胺和0.5g/L天門冬酰胺，能促進Jisheng-1體細胞胚的成熟和萌發(fā)。 2.建立了以低酚陸地棉Jisheng-1胚性愈傷組織作為外植體的農(nóng)桿菌介導的DREBlC轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)化體系，并獲得了轉(zhuǎn)化再生植株。

4、 以Jisheng-1愈傷組織為外植體，對轉(zhuǎn)化體系的幾個重要參數(shù)，如預培養(yǎng)的有無，農(nóng)桿菌的菌液濃度，共培養(yǎng)溫度，共培養(yǎng)時間，潮霉素的篩選濃度進行了優(yōu)化。結(jié)果表明：預培養(yǎng)7天的胚性愈傷組織較適合農(nóng)桿菌侵染；農(nóng)桿菌在對數(shù)生長期(OD600為0.4-0.6)進行侵染較適宜；共培養(yǎng)溫度以20℃為適宜溫度；共培養(yǎng)時間以60h為適宜時間；潮霉素的濃度以25mg/L為宜。相對于大多數(shù)用下胚軸作外植體的轉(zhuǎn)化體系來說，轉(zhuǎn)化效率更高：在較短的時間內(nèi)可以獲得