高溫脅迫下文心蘭對(duì)外源水楊酸的生理響應(yīng)及WRKY基因的克隆.pdf

1、文心蘭（Oncidium）屬蘭科（Orchidaceae）文心蘭屬（Oncidium）植物，原產(chǎn)于美國(guó)、墨西哥等地，目前在世界各地均有栽培，是國(guó)際花卉市場(chǎng)中極具競(jìng)爭(zhēng)力的花卉。其花色亮麗，花型獨(dú)特，姿態(tài)優(yōu)雅，具有很高的觀賞價(jià)值，廣受消費(fèi)者歡迎；可用于家庭裝飾和辦公場(chǎng)所綠化美化，也可以用來加工成花束，是一種較為高檔的切花材料。
　　高溫?zé)岷κ俏男奶m在熱帶和亞熱帶栽培中面臨的重要問題之一。本試驗(yàn)通過模擬高溫栽培環(huán)境，從抗氧化酶活性、滲透

2、物質(zhì)調(diào)節(jié)、膜通透性、葉綠素以及光合特性等方面對(duì)文心蘭的生理指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定，探討文心蘭在高溫脅迫條件下的生理生化變化，同時(shí)通過外施水楊酸研究SA對(duì)文心蘭高溫危害的緩解效應(yīng)。克隆了文心蘭WRKY轉(zhuǎn)錄因子OnWRKY1，利用In fusion技術(shù)將OnWRKY1構(gòu)建入表達(dá)載體pCAMBIA1302中，并將此表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌獲得工程菌。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下。
　　1.通過人工氣候箱模擬高溫栽培環(huán)境對(duì)文心蘭進(jìn)行高溫處理，發(fā)現(xiàn)在40℃（晝）/30

3、℃（夜）的高溫脅迫下，文心蘭葉片顏色發(fā)生明顯變化，葉上部偏黃色，葉基部呈現(xiàn)出不同程度的褐色。在高溫脅迫條件下噴施不同濃度水楊酸，對(duì)文心蘭植株具有一定的保護(hù)作用，處理濃度在1-5mmol/L效果較好。
　　2.在40℃（晝）/30℃（夜）高溫脅迫條件下，文心蘭植株體內(nèi)超氧化物歧化酶（SOD）活性上升，過氧化物酶（POD）和過氧化氫酶（CAT）活性下降；可溶性糖、可溶性蛋白和脯氨酸含量上升；電導(dǎo)率和丙二醛（MDA）含量持續(xù)升高；谷胱甘

4、肽（GSH）含量下降。噴施外源水楊酸的文心蘭植株在高溫脅迫下抗氧化酶活性的變化幅度相對(duì)較小，滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量明顯增加，細(xì)胞膜受到破壞的程度相對(duì)較輕，表明水楊酸對(duì)文心蘭高溫傷害具有一定的緩解作用。
　　3.在40℃（晝）/30℃（夜）高溫處理下，文心蘭葉片葉綠素含量降低；葉綠素?zé)晒庀嚓P(guān)參數(shù)中最大熒光Fm、初始熒光Fo和最大光化學(xué)效率Fv/Fm降低；qP、qN、ETR和ΦPSⅡ值均下降，說明高溫通過影響葉綠素的含量和特性，進(jìn)而抑制了文

5、心蘭的光合作用。1mmol/L的外源水楊酸處理后，高溫條件下對(duì)應(yīng)的熒光參數(shù)值較未噴施水楊酸的植株下降幅度減輕，說明水楊酸處理提高了文心蘭葉綠素的熱穩(wěn)定性，通過增加的qN來耗散過剩的光能，避免過剩的能量對(duì)葉片造成灼害，保護(hù)文心蘭葉片正常的光合作用，在一定程度上緩解了高溫對(duì)文心蘭植株的傷害。
　　4.以文心蘭的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果為基礎(chǔ)，通過RECE和RT-PCR技術(shù)克隆了文心蘭WRKY轉(zhuǎn)錄因子OnWRKY1，生物信息學(xué)分析顯示該基因的開放