外源水楊酸對(duì)高溫脅迫下葡萄幼苗生理特性的影響及誘導(dǎo)的蛋白激酶性質(zhì)研究.pdf

1、為了明確外源水楊酸(salicylic acid，SA)對(duì)高溫脅迫下葡萄幼苗耐熱性和膜脂過氧化以及抗壞血酸-谷胱甘(ascorbate-glutathione，AsA-GSH)循環(huán)代謝的影響；探明不同底物、不同處理時(shí)間、不同金屬離子及濃度以及不同腺嘌呤核苷三磷酸(adenosine triphosphate，ATP)濃度對(duì)蛋白激酶活性的影響；探明高溫和外源SA誘導(dǎo)的蛋白激酶類型。本試驗(yàn)以兩年生克瑞森無(wú)核葡萄苗為試驗(yàn)材料，探討了外源SA對(duì)

2、高溫脅迫下葡萄幼苗生理特性及其誘導(dǎo)的蛋白激酶性質(zhì)。本研究主要內(nèi)容包括：
　?、鸥邷孛{迫下，葡萄幼苗葉片內(nèi)丙二醛含量和電解質(zhì)滲透率隨著脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)而增加。噴施外源SA可以減少高溫脅迫下丙二醛含量和電解質(zhì)滲透率的增加量，特別是脅迫時(shí)間超過60min時(shí)，外源SA能夠顯著地降低丙二醛含量和電解質(zhì)滲透率的增加量，從而有效保護(hù)了細(xì)胞膜的完整性；外源SA在高溫脅迫下能夠維持較高的超氧化物歧化酶（superoxidase，SOD）、過氧化物酶（

3、peroxidase，POD）、過氧化氫酶(catalase，CAT)活性，并且隨著脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)（>120min）外源SA可以顯著提高SOD、POD、CAT等細(xì)胞保護(hù)酶活性的增加量，增強(qiáng)了清除細(xì)胞內(nèi)活性氧和自由基的能力；葡萄幼苗葉片的過氧化氫含量和超氧陰離子產(chǎn)生速率隨著脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，葉片噴施外源SA能夠顯著減少過氧化氫含量和超氧陰離子產(chǎn)生速率，降低了膜脂過氧化程度，提高了葡萄幼苗的耐熱性。
　?、聘邷孛{迫條件下，葡萄幼苗

4、葉片內(nèi)的游離脯氨酸含量隨著脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，可溶性蛋白含量隨著脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)出現(xiàn)先增加后降低的變化趨勢(shì)，在脅迫60 min時(shí)可溶性蛋白含量增加到最大。高溫脅迫和外源SA均可以誘導(dǎo)刺激葡萄葉片蛋白激酶的活性，蛋白酶活性也出現(xiàn)了隨著脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)先增加后降低的變化趨勢(shì)，且蛋白激酶活性的變化與可溶性蛋白含量變化具有高度的一致性，即脅迫60 min時(shí)可溶性蛋白含量增加到最大時(shí)，蛋白激酶活性也同時(shí)增高到最大值。reductase，GR)活性，

5、降低較長(zhǎng)時(shí)間高溫脅迫（>240min）下脫氫抗壞血酸(DHA)的含量，促進(jìn)AsA-GSH循環(huán)的快速有效的運(yùn)轉(zhuǎn)，降低植株的氧化傷害，緩解高溫脅迫對(duì)葡萄幼苗的傷害作用。
　?、歉邷睾屯庠碨A誘導(dǎo)的葡萄幼苗葉片中存在著能以髓鞘堿性蛋白(myelin basic protein，MBP)為底物，促進(jìn)蛋白質(zhì)的磷酸化反應(yīng)的蛋白激酶；建立了葡萄高溫脅迫下蛋白質(zhì)磷酸化反應(yīng)實(shí)驗(yàn)體系：以MBP為磷酸化底物，反應(yīng)時(shí)間以10min為最好；ATP適宜濃度為

6、50μmol/L時(shí)，Mg2+對(duì)于激活SA預(yù)處理和高溫脅迫誘導(dǎo)產(chǎn)生的蛋白激酶活性發(fā)揮具有重要作用，其濃度并非越高越好，但其適宜的濃度需要限定在一定范圍，蛋白激酶活性會(huì)隨著Mg2+濃度過大反而下降，最佳的Mg2+濃度以5.0mmol/L為宜。
　　⑷利用生物化學(xué)手段，采用專一作用底物MBP，利用蛋白激酶抑制劑W7和PD98059以及專一性蛋白磷酸酶YOP及其抑制劑Na3VO4，對(duì)高溫脅迫和外源SA誘導(dǎo)的蛋白激酶性質(zhì)進(jìn)行了探索，初步推斷