microRNA-212在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中的表達(dá)及意義.pdf

1、MicroRNAs(miRNAs，miR)是一種長度一般為18至25個(gè)核苷酸的高度保守的內(nèi)源性單鏈小分子RNA。MiRNAs不起到編碼蛋白質(zhì)的作用，但可以通過與特定目的基因mRNA的3'非翻譯區(qū)序列互補(bǔ)結(jié)合，從而起到抑制mRNA的翻譯過程或者直接致使其降解而調(diào)節(jié)下一步的生物學(xué)作用。自發(fā)現(xiàn)miRNAs之后，其在眾多領(lǐng)域中被廣泛研究。腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多基因作用的過程，而miRNAs由于其本身特點(diǎn)在腫瘤發(fā)生及進(jìn)展中起著重要的作用，故其近

2、年來已成為腫瘤研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。目前為止，MiRNAs已被證實(shí)與多種腫瘤相關(guān)。MiRNAs在腫瘤中主要通過調(diào)節(jié)不同的通路及其他基因而起到抑癌或促癌作用，它可以作用在細(xì)胞調(diào)節(jié)的各個(gè)環(huán)節(jié)，包括細(xì)胞循環(huán)、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞的遷移與侵犯等。
　　乳腺癌一直是嚴(yán)重威脅女性生命健康的全球性問題，近年來乳腺癌在外科手術(shù)及輔助治療方面的進(jìn)展已達(dá)到一定的局限，故怎樣尋求更有效的輔助治療手段提高乳腺癌預(yù)后一直是乳腺癌治療領(lǐng)域中的熱點(diǎn)問題。而miRNAs

3、的出現(xiàn)為乳腺癌指明了一條新的研究方向。目前為止，已有多種miRNAs被證實(shí)與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后及耐藥相關(guān)。而MiR-212雖被發(fā)現(xiàn)與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及侵襲性相關(guān)，如非小細(xì)胞性肺癌細(xì)、胰腺導(dǎo)管腺癌、胃癌等，但卻鮮有其與乳腺癌的可能關(guān)聯(lián)及作用機(jī)制的研究。
　　故本研究首先通過基于SYBR GreenⅠ染料熒光分析的Realtime RT-PCR技術(shù)檢測乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中的miR-212的表達(dá)，并分析其與乳腺癌常見的臨床病理特

4、征的關(guān)系。然后通過轉(zhuǎn)染miR-212 inhibitor至乳腺癌MCF-7細(xì)胞株中檢測其對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖活力及侵襲性的影響。探討miR-212在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中可能的作用及其臨床意義。
　　目的:
　　探索miR-212在浸潤性乳腺導(dǎo)管癌組織中的表達(dá)情況，并分析其與各臨床病理特點(diǎn)之間的相關(guān)性及對(duì)乳腺癌細(xì)胞的影響。
　　方法:
　　采用莖環(huán)Realtime RT-PCR技術(shù)檢測37例配對(duì)浸潤性乳腺癌癌組織及癌旁正常

5、乳腺組織組織中miR-212的表達(dá)情況，統(tǒng)計(jì)分析其表達(dá)水平并將之與乳腺癌常見臨床病理指標(biāo)做比較。設(shè)計(jì)并合成miR-212 inhibitor，分別以20、40、80nM濃度通過LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染乳腺癌MCF-7細(xì)胞株，同樣采用Realtime RT-PCR技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染前后MCF-7細(xì)胞株中miR-212表達(dá)情況。利用CCK-8法分析轉(zhuǎn)染miR-212 inhibitor后細(xì)胞活力，通過Transwell實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)

6、胞的侵襲能力。
　　結(jié)果:
　　1.根據(jù)擴(kuò)增曲線及溶解曲線結(jié)果發(fā)現(xiàn)利用Realtime RT-PCR檢測技術(shù)可特異性檢測miR-212的表達(dá)。
　　2.miR-212在浸潤性乳腺癌組織中的相對(duì)表達(dá)量明顯高于癌旁配對(duì)的正常乳腺組織，兩者的差異具有顯著性(P＜0.001)。
　　3.miR-212表達(dá)水平在乳腺癌患者合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中明顯高于其對(duì)應(yīng)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性患者(3.375 vs.1.452， P=0.003)。并

7、且較高TNM分期及較高增殖指數(shù)(ki67)的乳腺癌患者也具有較高的miR-212表達(dá)水平(Ⅲ期=4.422 vs.Ⅱ期=2.633 vs.Ⅰ期=1.452;P=0.015)，(3.260 vs.1.394，P=0.013)。未發(fā)現(xiàn)乳腺癌中miR-212表達(dá)水平與月經(jīng)狀況、腫塊大小、雌激素和孕激素受體狀態(tài)、Her-2等其他病理指標(biāo)相關(guān)(P＞0.05)。
　　4.不同濃度miR-212 inhibitor轉(zhuǎn)染后的MCF-7細(xì)胞株中表達(dá)

8、miR-212較陰性對(duì)照組及空白組均明顯減少(P＜0.001)。
　　5.CCK-8實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)不同濃度miR-212 inhibitor的轉(zhuǎn)染組較對(duì)照組及空白組細(xì)胞增殖活力均明顯下降，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.001)，提示miR-212表達(dá)下調(diào)導(dǎo)致細(xì)胞活力下降。
　　6.Transwell實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)不同濃度miR-212 inhibitor的轉(zhuǎn)染組透膜細(xì)胞明顯少于陰性對(duì)照組及空白組(P＜0.001)，提示抑制miR-212表達(dá)可