羥基磷灰石納米顆粒介導的NR2B-siRNA對小鼠炎性痛的影響.pdf

1、目的：觀察羥基磷灰石納米顆粒(HA)介導的N-甲基-D-天門冬氨酸(NMDA)受體2B亞基(NR2B)小干擾RNA(siRNA)鞘內(nèi)轉(zhuǎn)染后對小鼠福爾馬林所致炎性痛的影響以及脊髓背角NR2B蛋白表達的變化，初步探討羥基磷灰石納米顆粒作為NR2B-siRNA體內(nèi)轉(zhuǎn)染載體的可行性。 方法：采用化學共沉淀-水熱合成法制備HA，用瓊脂糖凝膠電泳法及紫外分光光度計檢測HA對NR2B-siRNA的結(jié)合能力和該復合物在生理鹽水中的穩(wěn)定性。選用體

2、重約18-20g的成年雄性昆明種小鼠48只，隨機分為六組。第一組(HN組，8只)：以HA為載體，將NR2B-siRNA鞘內(nèi)轉(zhuǎn)染小鼠；第二組(PN組，8只)：以聚乙烯亞胺(PEI)為載體，同樣的方法將NR2B-siRNA鞘內(nèi)轉(zhuǎn)染小鼠；第三組(HG組，8只)：用HA作載體，將非特異性的綠色熒光蛋白(GFP)的siRNA鞘內(nèi)轉(zhuǎn)染小鼠，作為NR2B-siRNA的陰性對照；第四組(HA組，8只)：鞘內(nèi)給予小鼠同等容積的滅菌HA混懸液；第五組(NS

3、組，8只)：鞘內(nèi)給予小鼠同等容積的無菌生理鹽水；第六組(BC組，8只)：只行鞘內(nèi)穿刺術，不注射任何溶液。術后第7天，各組均經(jīng)右足底皮下注入1％福爾馬林20ul，行為學檢測1小時。福爾馬林試驗后，各組立即取腰段脊髓用于脊髓切片的NR2B免疫組化檢測。 結(jié)果：對羥基磷灰石納米顆粒進行透射電鏡分析發(fā)現(xiàn)顆粒呈細條狀或短棒狀，分散較均勻，一維尺寸約40-50nm。在酸性和中性條件下，HA能與NR2B-siRNA以35:1及以上的質(zhì)量比完全

4、結(jié)合，但在堿性條件下與NR2B-siRNA結(jié)合能力弱；且HA/NR2B-siRNA復合物在生理鹽水重懸液中不會發(fā)生解離。對于福爾馬林所致的Ⅰ相急性痛，所有組間的急性期傷害性反應無差別(P>0.05)；而與HG組、HA組、NS組和BC組相比，HN組和PN組對于福爾馬林所致的Ⅱ相持續(xù)痛的傷害性反應顯著減少(P<0.05)，HN組和PN組組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，對照組之間差異無顯著性(P>0.05)。脊髓免疫組織化學染色顯示，H

5、N組、PN組、HG組、HA組、NS組和BC組各組脊髓背角NR2B陽性細胞數(shù)分別為53.79±11.38，60.63±9.9，99.04±16.39，91.42±14.39，101.21±16.82，96.38±10.27。與HG組、HA組、NS組、BC組相比，HN組和PN組脊髓背角NR2B陽性細胞數(shù)明顯減少(P<0.05)，HN組和PN組組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，對照組之間差異無顯著性(P>0.05)。 結(jié)論：