腎綜合征出血熱免疫診斷技術(shù)及其應(yīng)用研究.pdf

1、目的：腎綜合征出血熱(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)是由布尼亞病毒科漢坦病毒屬病毒引起的自然疫源性傳染病.HFRS在我國(guó)的發(fā)病率占全球總數(shù)的90％,病死率為3％~10％,是我國(guó)重點(diǎn)防治的傳染病之一.由于HFRS臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣,病情變化迅速,常給臨床診斷帶來(lái)一定困難.目前,血清學(xué)檢測(cè)方法仍然是HFRS實(shí)驗(yàn)室診斷的主要方法,但是建立在抗原抗體反應(yīng)基礎(chǔ)上的血清學(xué)檢測(cè)方法的敏感性達(dá)不到臨

2、床診斷的要求,常造成漏診和誤診,病人往往因得不到及時(shí)診斷而延誤治療.因此,建立高敏感性和高特異性的HFRS實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)對(duì)于HFRS的輔助診斷具有重要意義.該實(shí)驗(yàn)借鑒免疫-PCR技術(shù)高敏感性的特點(diǎn),將其應(yīng)用于HFRS的輔助診斷,進(jìn)行以下研究:(1)將漢坦病毒HTN型標(biāo)準(zhǔn)株76-118株核衣殼蛋白(nucleocapsid protein,NP)基因克隆到原核表達(dá)載體pGEX-6P-1中,構(gòu)建重組表達(dá)載體pGEX-6P-1-hanS,并在

3、大腸桿菌中進(jìn)行有效的表達(dá),以期獲得具有生物學(xué)活性的重組蛋白,為漢坦病毒的臨床診斷和流行病學(xué)調(diào)查研究提供一種廉價(jià)、安全、可靠的免疫診斷抗原.(2)以HFRS患者血清中抗HFRS-IgG抗體作為待測(cè)抗體,重組NP作為診斷抗原,創(chuàng)建可用于檢測(cè)抗HFRS-IgG抗體的免疫-PCR檢測(cè)方法,并與傳統(tǒng)的ELISA方法進(jìn)行比較,以期闡明免疫-PCR方法用于HFRS診斷的可行性及優(yōu)越性.(3)應(yīng)用免疫-PCR方法檢測(cè)HFRS不同病程患者血清中抗HFRS

4、-IgM抗體,期望建立一種適合于基層醫(yī)療單位通用的HFRS早期診斷方法.結(jié)論1.該實(shí)驗(yàn)成功克隆并構(gòu)建了融合蛋白表達(dá)載體pGEX-6P-1-hanS,獲得了高效表達(dá)的重組核衣殼蛋白.重組核衣殼蛋白與完整的天然病毒蛋白具有相同的生物學(xué)活性,可用作漢坦病毒感染的實(shí)驗(yàn)室診斷和流行病學(xué)調(diào)查研究的免疫診斷抗原.2.該研究首次建立了高敏感性、高特異性的可用于HFRS抗HFRS-IgG抗體檢測(cè)方法--免疫-PCR方法;該方法的敏感性是傳統(tǒng)ELISA法的