中國(guó)境內(nèi)部分區(qū)域葡萄霜霉病菌(Plasmopara viticola)的遺傳分化.pdf

1、葡萄霜霉?。℅rape Downy Mildew, GDM）由葡萄霜霉菌（Plasmopara viticola）引起，是世界范圍內(nèi)威脅葡萄生產(chǎn)的一種重要病害，常給葡萄產(chǎn)業(yè)帶來(lái)重大經(jīng)濟(jì)損失。為研究葡萄霜霉菌對(duì)中國(guó)不同地區(qū)葡萄霜霉菌群體的遺傳分化，本研究利用單斑分離法獲取較純菌株，通過(guò)多基因型分析方法對(duì)葡萄霜霉病菌進(jìn)行遺傳分化多態(tài)性分析，為葡萄霜霉病的防治提供分子水平的理論依據(jù);同時(shí)也可以豐富葡萄霜霉菌遺傳分化的數(shù)據(jù)庫(kù)。
　　本研究

2、以來(lái)自中國(guó)9個(gè)省、市的103份葡萄霜霉菌樣品為材料，利用多基因型分析方法進(jìn)行遺傳分化和親緣關(guān)系研究，主要研究結(jié)果如下:
　　1.由于菌株的易污染因而獲得葡萄霜霉病菌的單孢純培養(yǎng)困難，本研究開(kāi)發(fā)了一種簡(jiǎn)便、快速、易操作且成功率高的葡萄霜霉病菌單孢子囊分離培養(yǎng)方法，成功構(gòu)建了葡萄霜霉病菌菌株純化與快速擴(kuò)繁體系。
　　2.本研究對(duì)常規(guī)DNA提取方法—十六烷基三甲基溴化銨法進(jìn)行了改良，用75％無(wú)水乙醇對(duì)收集的葡萄霜霉病菌樣品進(jìn)行雜質(zhì)

3、消除處理，保證葡萄霜霉病菌基因組DNA的質(zhì)量和純度，使其能滿(mǎn)足多基因型技術(shù)的分析要求。
　　3.通過(guò)對(duì)P.viticola基因序列的多態(tài)性分析，計(jì)算種群的單倍型多樣性Hd、核苷酸多樣性指數(shù)π、核苷酸平均差異數(shù)k、及Tajima's D值中性檢測(cè)的結(jié)果顯示我國(guó)不同地區(qū)葡萄霜霉病菌種群間物種的進(jìn)化存在多樣性，核苷酸多樣度較高，β-微管蛋白(TUB)基因和肌動(dòng)蛋白基因的片段(ACT)中性檢測(cè)P＜0.001差異極顯著，表明基因的滲透和在群

4、體遺傳分化中的影響較大。
　　3.以葡萄霜霉病菌的標(biāo)準(zhǔn)菌株序列作為參考，以大豆疫霉Phytophthora-sojae為外圍菌株進(jìn)行多位點(diǎn)整合分析。運(yùn)用遺傳進(jìn)化分析軟件PAUP(V4.0)，通過(guò)TBR(treebisection-reconnection)交換算法的啟發(fā)式搜索(heuristic search)得到，multitrees參數(shù)選用（默認(rèn)），同時(shí)進(jìn)行1000次Bootstrap自舉法檢驗(yàn)，并將Bootstrap產(chǎn)生的自