翻白草和屬間藥用植物的ISSR分析及HPLC指紋圖譜分析.pdf

1、翻白草學(xué)名：Poterntilla discolor Bge，英文名：Discolor Cinquefoil Herb，薔薇科委陵菜屬多年生草本植物。具清熱解毒、消炎鎮(zhèn)痛、抗菌、抗病毒、降血糖等功能，在臨床上多以翻白草的水煎劑用作內(nèi)服藥，如治療出血性疾病，阿米巴痢疾等；或者結(jié)合其它中藥水煎劑治療風(fēng)濕麻木癱瘓、筋骨久痛、風(fēng)癱、癲癇等。本文對翻白草的有效成分、藥理作用和臨床應(yīng)用等方面的研究進行分析歸納，認(rèn)為翻白草生物活性較高，療效確切，值得

2、進一步推廣應(yīng)用，應(yīng)進一步加強翻白草的基礎(chǔ)研究，研制現(xiàn)代中藥新劑型。 近年來翻白草的研究集中在其有效成分、藥理作用等方面，還未見在分子水平上的研究。本文從分子水平初步研究了翻白草種質(zhì)資源及屬間藥用植物的親緣關(guān)系，同時建立了HPLC指紋圖譜，對黃酮類化合物進行分析。主要研究內(nèi)容有以下幾個方面： 翻白草種子具有休眠特性，自然條件下發(fā)芽率不高。本文采用赤霉素、碳酸鈉、殼聚糖和低溫層積處理研究解除翻白草種子休眠、促進萌發(fā)、提高發(fā)芽

3、率的方法。 本文利用ISSR(inter-simpie sequence repeat)分子標(biāo)記技術(shù)對翻白草同屬的6種藥用植物的親緣關(guān)系進行了研究和分析。首先對翻白草ISSR體系進行建立和優(yōu)化，確立了翻白草的ISSR-PCR的最佳體系。確立體系后，根據(jù)ISSR擴增結(jié)果發(fā)現(xiàn)了這種親緣關(guān)系與地域分布有一定關(guān)系，從分子水平將供試材料區(qū)分開來，為DNA指紋圖譜的建立奠定基礎(chǔ)。同時對12份不同地區(qū)的翻白草種質(zhì)進行了基因組DNA多態(tài)性分析。

4、從50條引物中篩選出12條多態(tài)性引物用于PCR擴增，共擴增出128條DNA條帶，其中多態(tài)性DNA條帶104條，占總條帶數(shù)的81.25％。根據(jù)ISSR擴增結(jié)果，利用POPGENEL.32軟件計算了Nei’s基因距離，并用MEGA3.1軟件通過UPMGA法進行了聚類分析。結(jié)果表明：翻白草種質(zhì)資源具有較豐富的遺傳多樣性；ISSR技術(shù)可將12份供試的翻白草材料全部分開，根據(jù)ISSR遺傳距離系數(shù)劃分的類群與地理位置分布有一定關(guān)系。 高效液

5、相色譜(HPLC)是建立中藥指紋圖譜的一種重要方法。本文建立了翻白草及屬間兩種藥用植物黃酮類化合物的HPLC指紋圖譜。色譜條件為：色譜柱為Atlantis C18(250mm×4.6mm，5μm)，流動相為甲醇：水：40：60，流速為1.0mL/min，柱溫為25℃，檢測波長：368nm，進樣量2μL。結(jié)果檢測出10個分離度良好的共有指紋峰，計算了共有峰的相對保留時間和相對峰面積，結(jié)果表明該方法可作為科學(xué)評價及有效控制中藥質(zhì)量的可行的定