EGb761對過氧化氫預(yù)處理PC12細胞的保護作用.pdf

1、老年性癡呆又稱阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)，是一種好發(fā)于中老年人的神經(jīng)退行性變疾病，以記憶丟失和認知功能障礙為典型臨床表現(xiàn)。其病因目前尚不清楚，大多認為是一種多病因疾病，與遺傳、增齡、免疫功能異常、感染等有關(guān)。大量的研究表明，氧化應(yīng)激在AD等神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病中起著重要作用。可溶性的Aβ、Aβ原纖維、神經(jīng)元纖維纏結(jié)、線粒體異常和老化等均可引起氧化應(yīng)激的發(fā)生。EGb761的主要成分黃酮是最強的天然抗氧化劑

2、之一，能清除自由基，減少脂質(zhì)過氧化物和脂褐素的生成與沉積，提高超氧化歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)的活性，保護細胞膜，調(diào)節(jié)器官組織功能，有效延緩衰老。許多研究表明氧化預(yù)處理是減輕氧化應(yīng)激對細胞損傷的有效途徑。體內(nèi)內(nèi)源性氣體信號分子硫化氫(hydrogen sulphide，H2S)可通過抑制細胞凋亡從而對神經(jīng)細胞起到保護作用。 本研究通過建立PC12細胞的損傷模型，探討幾種處理因素EGb761、H2O

3、2預(yù)處理、H2S對H2O2引起的PC12細胞損傷的保護作用以及各處理因素間是否存在配伍關(guān)系，為EGb761在AD治療中的可能應(yīng)用提供實驗依據(jù)。 目的： 探討EGb761對H2S處理、過氧化氫預(yù)處理后再給予過氧化氫損傷的PC12細胞的作用。分別討論EGb761、硫化氫和過氧化氫三種處理因素對抗細胞凋亡的作用和機制。 方法： 1.實驗分組 根據(jù)實驗需要分組如下： (1)空白對照組； (

4、2)H2O2處理； (3) EGb761+ H2O2處理； (4) H2S+ H2O2處理； (5) EGb761+ H2S+H2O2處理； (6) H2O2預(yù)處理+H2O2處理； (7) EGb761+ H2O2預(yù)處理+H2O2處理； (8) H2S+H2O2預(yù)處理+H2O2處理； (9) EGb761+ H2S+H2O2預(yù)處理+H2O2處理； 2.分組干擾因素

5、用低濃度的H2O2(100μM)作用于PC12細胞90min，接著給予24h的恢復(fù)期，應(yīng)用EGb761標準品溶液，應(yīng)用硫化氫鈉(sodium hydrosulfide，NaHS)作為H2S的供體作用于PC12細胞，再給予實驗所需要濃度的H2O2(300μM)作用于PC12細胞12h。 3.細胞的凋亡情況 碘化丙啶(PI)染色流式細胞技術(shù)(FCM)檢測細胞凋亡率，Hoechst染色檢測細胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化，甲氮甲唑藍(MT

6、T)法檢測細胞存活率，羅丹明123(rhodamine123)染色FCM檢測細胞細胞線粒體膜電位(Mitochondrial membrane potential，MMP)的含量。 4.統(tǒng)計學(xué)分析 所得數(shù)據(jù)結(jié)果用均數(shù)±標準差(-x±s)表示，利用SPSS10.0統(tǒng)計軟件分析，P<0.05認為有統(tǒng)計學(xué)意義。計量資料多組均數(shù)比較采用方差分析。 結(jié)果： (1) H2O2預(yù)處理可以對抗高濃度H2O2誘導(dǎo)的PC12

7、細胞損傷：用較小濃度的H2O2預(yù)處理之后再進行損傷處理的組別對照未進行預(yù)處理的組別，預(yù)處理增加了細胞生存率、降低凋亡率、增加線粒體膜電位(MMP)； (2) EGb761可以對抗高濃度H2O2誘導(dǎo)的PC12細胞損傷：使用100μmol/LEGb761與300μM H2O2共同作用的組別對照未進行藥物處理的組別，藥物組增加了細胞生存率、降低凋亡率、增加線粒體膜電位(MMP)； (3) H2S可以對抗高濃度H2O2誘導(dǎo)的PC

8、12細胞損傷：使用100μmol/L NaHS與300μM H2O2共同作用的組別對照未進行藥物處理的組別，藥物組增加了細胞生存率、降低凋亡率、增加線粒體膜電位(MMP)； (4) EGb761和NaHS聯(lián)合作用可以對抗高濃度H2O2誘導(dǎo)的PC12細胞損傷； (5)預(yù)處理組聯(lián)合藥物組和單純使用藥物或者預(yù)處理的組別均可以觀察到細胞生存率增高、凋亡率降低、線粒體膜電位(MMP)增加。 結(jié)論： 1.H2O2會引

9、起氧化應(yīng)激，從而導(dǎo)致PC12細胞凋亡； 2.以較小濃度的H2O2進行預(yù)處理，可以起到一定的保護作用； 3.EGb761可以一定程度上抑制H2O2引起的氧化應(yīng)激對于細胞的損傷； 4.EGb761和H2O2預(yù)處理能協(xié)同的抑制H2O2引起的氧化應(yīng)激對于細胞的損傷； 5.NaHS能明顯對抗H2O2引起的PC12細胞的凋亡，此保護作用可能與NaHS保護PC12細胞的MMP有關(guān)； 6.NaHS和H2O2預(yù)處理