NaNO2預處理對過氧化損傷PC12細胞的保護作用.pdf

1、目的：探討低劑量亞硝酸鈉（NaNO2）預處理對過氧化損傷鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤（PC12）細胞的保護作用；同時觀察其誘導PC12 細胞分化的作用。
　　 方法：分別以系列濃度的NaNO2 作用PC12 細胞不同時間，采用四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測NaNO2 對PC12 細胞活力的影響，研究劑量-效應和時間-效應關系，尋找最低促增殖效應劑量和最佳促增殖效應時間。過氧化損傷PC12 細胞模型制作采用400mmol·L-1 乙醇、45

2、 mmol·L-1 NaNO2、1.1 mmol·L-1 過氧化氫（H2O2）處理2 h。細胞增殖指標采用MTT、活細胞計數(shù)法、Hoechst33258 熒光單染計數(shù)有絲分裂指數(shù)；細胞凋亡檢測采用Hoechst33258染色計數(shù)細胞凋亡率、流式細胞術(FITC-annexin/PI)Ⅴ雙染法和Hoechst 33258/PI活細胞染色法；比色法測定超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)活力和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙

3、二醛（MDA）含量。Western-blotting 檢測相關蛋白表達。瑞氏染色觀察PC12 細胞分化狀態(tài)。
　　 結果：MTT 結果顯示，低劑量NaNO2 促進細胞增殖，高劑量抑制其增殖，劑量-效應關系呈典型的倒U 型曲線。NaNO2 最低促增殖劑量為（促增殖效應高于對照組的15％）0.14 mmol·L-1，最佳促增殖效應時間點出現(xiàn)在第24 h；400 mmol·L-1 乙醇、45mmol·L-1的NaNO2、1.1 mmo

4、l·L-1 H2O2 作用PC12 細胞2 h，流式細胞術結果顯示，細胞凋亡率分別為(50.63±2.14)％、(52.06±8.32)％、(53.6±8.51)％，用0.14 mmol·L-1NaNO2 預處理細胞24 h，再分別用上述氧化劑作用2 h，細胞凋亡率分別下降為（19.71±3.19）％、(19.65±2.17)％、(18.23±4.19)％ 差異具有顯著性（P﹤0.05）；用0.14mmol·L-1 NaNO2和一氧化氮

5、清除劑(c-PTIO)預處理細胞24 h，再用上述氧化劑作用2 h，細胞凋亡率則分別為（32.28±7.31）％、(38.63±5.08)％、(30.75±3.81)％。Hoechst33258染色、Hoechst 33258/PI活細胞染色計數(shù)細胞死亡率結果與其相似。
　　 用400 mmol·L-1 乙醇作用PC12 細胞2 h，SOD、CAT 酶活性，GSH-Px、MDA 含量分別為(20.95±1.68)U/mg.Pro

6、t、(11.45±0.93)U/mg.Prot、(41.17±2.72)μmol/mg.Prot、(98.38±11.5)μmol/mg1.Prot，用NaNO2 預處理細胞再用乙醇作用，SOD、CAT 酶活性和GSH-Px、MDA 含量分別為（62.38±2.98）U/mg.Prot、(19.29±0.27)U/mg.Prot、(62.59±1.41)μmol/mg.Prot、(49.38±2.93)μmol/mg.Prot;用NaN

7、O2+c-PTIO 預處理細胞24 h，再用乙醇作用2 h，SOD、CAT 酶活性和GSH-Px、MDA 含量分別為（40.23±1.57）U/mg.Prot、(15.98±1.9)U/mg.Prot、(51.21±1.52)μmol/mg.Prot、(73.58±14.7)μmol/mg.Prot。用NaNO2預處理再用乙醇作用組，與單純乙醇組相比，Bax、Caspase-9、Caspase-3蛋白表達量降低，Bcl-2和HIF-1α

8、蛋白表達量升高（P﹤0.05）；c-PTIO 可以部分逆轉這種現(xiàn)象。45mmol·L-1 NaNO2和1.1 mmol·L-1 H2O2 處理細胞，上述各指標變化情況與乙醇組一致。瑞氏染色結果顯示，0.14 mmol·L-1 NaNO2 作用PC12 細胞48 h，明顯促進PC12 細胞突起生長，缺氧誘導因子（HIF-1α）、血管內皮生長因子（VEGF）表達量增加，作用效果類似神經生長因子(NGF)。C-PTIO 可以部分抑制這種現(xiàn)象。