空心蓮子草Apcl基因抗旱功能鑒定.pdf

1、干旱是影響農(nóng)作物生產(chǎn)的主要非生物因素之一。目前,通過(guò)基因工程方法對(duì)作物進(jìn)行改良已成為傳統(tǒng)育種方式之外增強(qiáng)作物逆境適應(yīng)性的又一重要手段。空心蓮子草(Alternanthera philoxeroides(Mart.)Griseb)作為兩棲植物具有非常強(qiáng)的環(huán)境適應(yīng)能力,是研究植物抗逆機(jī)理的優(yōu)良材料,也是植物抗逆基因的重要來(lái)源。
　　本課題組在之前的研究中通過(guò)差異顯示技術(shù)從空心蓮子草中分離得到一個(gè)干旱誘導(dǎo)上調(diào)基因的cDNA全長(zhǎng),開(kāi)放閱讀

2、框501bp,推導(dǎo)出的蛋白質(zhì)有166個(gè)氨基酸組成,分子量16.7kD。通過(guò)同源比較,發(fā)現(xiàn)其與cryptogein(隱地蛋白)編碼基因有較高同源性,因此命名為Apcl(Alternanthera philoxeroides cryptogein like)基因。
　　本文首先證明了Apcl基因確實(shí)為空心蓮子草內(nèi)源基因。
　　然后,通過(guò)畢赤酵母真核表達(dá)系統(tǒng)對(duì)Apcl基因抗旱功能進(jìn)行研究。第一步,構(gòu)建pGAPZα-Apcl真核表達(dá)

3、重組質(zhì)粒;第二步,將pGAPZα-Apcl線形化后用電轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入畢赤酵母內(nèi);第三步,在培養(yǎng)基中加入不同濃度的山梨醇模擬干旱環(huán)境,對(duì)轉(zhuǎn)基因酵母進(jìn)行抗旱性檢測(cè)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,在液體培養(yǎng)中,含有Apcl基因的酵母菌液濃度與不含 Apcl基因的酵母菌液濃度均隨培養(yǎng)基中山梨醇濃度升高而降低,但前者減低的速度遠(yuǎn)小于后者,在山梨醇濃度為1.2mol/L和1.5mol/L培養(yǎng)條件下,前者濃度甚至達(dá)到后者濃度的2～3倍。在固體培養(yǎng)中,含Apc