煙草黑脛病菌對六種殺菌劑的抗性測定及抗甲霜靈機(jī)制的初步研究.pdf

1、煙草黑脛病是世界煙草生產(chǎn)中危害最嚴(yán)重的病害之一，也是我國煙草的主要病害。本研究采用菌落生長速率法，測定了2005年從云南、貴州和山東主要煙區(qū)病株上分離到的煙草黑脛病菌(Phytophthora nicotianae var.nicotianae) 38個(gè)菌株對2種保護(hù)性殺菌劑和4種內(nèi)吸性殺菌劑的抗性；采用頻次分析法建立了煙草黑脛病菌對6種殺菌劑的敏感性基線；通過對煙草黑脛病菌的藥劑誘導(dǎo)，獲得了抗甲霜靈的低抗及高抗突變株；檢測了各個(gè)抗性菌

2、株抗藥性的遺傳穩(wěn)定性；測定了各個(gè)抗性菌株的抗性水平；比較了低抗菌株、高抗菌株和敏感菌株的菌落生長速率，誘導(dǎo)并比較了低抗菌株、高抗菌株和敏感菌株的孢子囊數(shù)量，采用活體接種法比較了低抗菌株、高抗菌株和敏感菌株之間的致病力，比較了低抗菌株、高抗菌株和敏感菌株之間的適合度；比較了不同濃度的甲霜靈處理后低抗菌株、高抗菌株和敏感菌株所在溶液的電導(dǎo)率變化情況；比較了低抗菌株、高抗菌株和敏感菌株的酯酶同工酶和可溶性蛋白質(zhì)的聚丙烯酰胺凝膠電泳圖譜；測定了

3、抗甲霜靈煙草黑脛病菌突變株對5種參試殺菌劑的交互抗性。研究結(jié)果表明： 1.百菌清、代森錳鋅、甲霜靈、霜脲氰、乙膦鋁和霜霉威對38個(gè)菌株的EC<,50>值分布在2.3325～49.471、3.5098～82.055、0.0867～1.6781、24.042～62.663、60.468～239.51和2493.3～19625μg/mL 之間，均值為9.3509±2.7721、10.590±4.0556、0.2991±0.0843、3

4、5.891±2.7823、105.73±11.154和9688.7±1.396.4μg/mL；煙草黑脛病菌對上述6種殺菌劑的抗性低，尚未出現(xiàn)抗性上升的抗藥性亞群體。 2.百菌清、代森錳鋅、甲霜靈、霜脲氰、乙膦鋁和霜霉威對均來自敏感群體、組成近正態(tài)連續(xù)抗性頻次分布的30、37、34、37、37和25個(gè)菌株的EC<,50>均值5.9856±0.7817、8.6588±1.0941、0.2389±0.0292、35.167±2.431

5、7、102.11±8.6497和7136.1±929.93μg/mL，可分別作為煙草黑脛病菌對上述6種殺菌劑的敏感性基線。 3.通過甲霜靈誘導(dǎo)，獲得了10個(gè)低抗突變株及1個(gè)高抗突變株。在0～20μg/mL的濃度范圍內(nèi)，抗性突變株的發(fā)生頻率隨甲霜靈濃度的增加而提高，突變株的發(fā)生頻率與誘導(dǎo)藥劑濃度的對數(shù)之間存在高度正相關(guān)。 4.盡管甲霜靈對11個(gè)抗性突變株的菌落生長抑制率在不同世代間的變化復(fù)雜，但最后都從第2代、第4代或第6

6、代開始穩(wěn)定下來，說明所有抗性突變株的抗藥性都能穩(wěn)定遺傳。 5.11個(gè)抗性突變株中，10個(gè)為低抗性突變株，甲霜靈對其EC<,50>值分布在1.1257～ 4.4157μg/mL 之間，EC<,50>均值為2.7267μg/mL，抗性水平分布在3.54～13.90之間，抗性水平均值為8.59；10M-004為高抗性突變株，甲霜靈對其的EC<,50>值(161.77μg/mL)最大，其抗性水平(509.83)最高；沒有出現(xiàn)中抗

7、突變株。提示抗甲霜靈突變可能屬于質(zhì)量性狀的突變。 6．煙草黑脛病菌的所有供試抗性突變株的離體適合度指數(shù)、活體適合度指數(shù)及綜合適合度指數(shù)均低于敏感菌株：抗性突變株中，高抗突變株10M-004的離體適合度指數(shù)、活體適合度指數(shù)及綜合適合度指數(shù)均最高；離體適合度指數(shù)、活體適合度指數(shù)及綜合適合度指數(shù)與抗甲霜靈水平之間均不存在相關(guān)性。 7．甲霜靈能對煙草黑脛病菌的細(xì)胞膜造成傷害，使敏感菌株ZC002和低抗菌株10M-006的細(xì)胞膜透性不斷上

8、升；高抗菌株10M-004適應(yīng)甲霜靈的能力明顯高于敏感菌株ZC002和低抗菌株10M-006，其細(xì)胞膜受傷害的程度相對較低，且這種適應(yīng)能力隨著甲霜靈濃度的提高而減弱。 8．煙草黑脛病菌對甲霜靈的敏感菌株ZC002、低抗菌株10M-006和高抗菌株10M-004在酯酶同工酶電泳圖譜上存在著明顯的特異性差異。R<,f> 0.705和R<,f> 0.849酶帶為敏感菌株ZC002的特征帶，R<,f> 0.487酶帶為高抗菌株10M-0

9、04的特征帶。高抗菌株10M-004和低抗菌株10M-006的R<,f>0.026酶帶的量高于敏感菌株ZC002。 9．煙草黑脛病菌對甲霜靈的敏感菌株ZC002、低抗菌株10M-006和高抗菌株10M-004在可溶性蛋白質(zhì)電泳圖譜上沒有明顯的特異性差異，但抗性菌株可溶性蛋白的含量比敏感菌株高。 10．抗甲霜靈煙草黑脛病菌菌株對有機(jī)硫類保護(hù)性殺菌劑代森錳鋅有負(fù)交互抗性現(xiàn)象，而對取代苯類保護(hù)性殺菌劑百菌清、乙酰胺類內(nèi)吸性殺菌