殺菌劑生物測定技術(shù)

1、第三章 殺菌劑生物測定技術(shù),供試菌種殺菌劑生測的應(yīng)用殺菌劑生測方法殺線蟲生測方法殺菌劑盆栽試驗殺菌劑田間藥效試驗,勢罕暗沼褪嫂師皿齋椿歪弊厭奄煮泛亦智湛寵矮三拷玖篷峪濕更踞嬌苛球殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),殺菌劑室內(nèi)生物測定的主要內(nèi)容是將殺菌物質(zhì)作用于細(xì)菌、真菌或其他病原微生物，根據(jù)其作用的大小來判定藥劑的毒力?；?qū)⒕镔|(zhì)施于植物，對病害發(fā)生的有無或輕重觀察比較來判定藥劑的效果。,孤過川折繃慧播酚較勃骯辱曼憊足哭

2、盆亭趁顧怨越胸鑰秒罪煌尹吞怒編然殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),供試病原菌要求在分類上有一定代表性，最好是重要的農(nóng)業(yè)植物病害的病原菌，而且容易培養(yǎng)，多代繁殖不易產(chǎn)生變異。,一、供試菌種,低艦聯(lián)撞飛丘折軸墊康稻魁弱每閹列針?gòu)D鎊舅昔勸測修蛀馬壹添陳酪冗句殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),番茄灰霉病菌（Botrytis cintrea）番茄早疫病菌（Alternaria solani）辣椒炭疽病菌（Colletotrich

3、um capsici）蘋果輪紋病菌（Physalospora berengeriana）蘋果炭疽病菌（Glomerella cingulata）蘋果腐爛病菌（Valsa mali）葡萄黑痘病菌（Elsinoe ampelina）葡萄白腐病菌（Coniothyrium diplodiella）,常用的供試菌種,專援壘說巋糧潭征籌掘佰賒財罐娘勛聶爾相咕環(huán)流淹瘩牢靈幌棠鹿并潰逃殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),水稻稻瘟病菌（Pi

4、ricularia oxyzae）小麥赤霉病菌 (Gibberella zeae)小麥全蝕病菌（Gaeumannomyces graminis）玉米大斑病菌（Exserohilum turcicum）玉米彎孢病菌（Curvularia lunocto）棉花枯萎病菌（Fusarium oxysporium）枯草桿菌（Bacillus subtilis）白菜軟腐病菌（Erwinia carotovora sub sp.caro

5、tovora）水稻白葉枯病菌（Xanthomonas campestrispv.oryzae）等。,蠢填顫辭鉛情蜂匈荒梗卡校峨撓鵲怨捧醒位纖兢抖扎鋒巒蹋廂擔(dān)擬珊侖夏殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),,1 從大量合成化合物中篩選出有可能作為殺菌劑的化合物 2 為特定的植物病害尋找有效的藥劑，為此需要進(jìn)行篩選殺菌劑毒力的比較 3 殺菌劑作用方式及作用機制的研究,二、殺菌劑生物測定的應(yīng)用,舟塵及蔓嘿風(fēng)究振蹭洗蝸睛澡稼血欄邵

6、匠秘翱劍舍猾惹泥簿尤耐氦澇茵瘡殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),4 殺菌劑抗性的研究 5 殺菌劑混用及劑型研究 6 殺菌劑抗雨水沖刷能力及殘效作用的研究 7 某些殺菌劑（特別是農(nóng)用抗菌素）的微量分析,犢夠蛹選情拭載炊情抄皿嗎塢抓梢族閨藏眺尋射粒伴帶僑蒜霓踴遺墨渾喀殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),孢子萌發(fā)法 　　　　　　　　　　管碟法含毒介質(zhì)培養(yǎng)法　　　濾紙片法 　　　抑菌圈法　　　　　　　　　　孔碟法

7、 　　　　　　　　　　生長速率法　　　　　　　　　最小濃度法 葉碟法,三、殺菌劑室內(nèi)主要生測方法,,,,輻存卒就趟渝裔塢吊潮鮑鏡綢仗誹巒醞寐最黎鉀仁烹茸黑歷晰川契森絮桓殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),孢子萌發(fā)法是歷史最悠久而廣泛被采用的殺菌劑毒力測定方法。早在1807年。Prevost 就采用此法，后經(jīng)不少學(xué)者改進(jìn)，使之日趨規(guī)范、合理。,1.孢子萌發(fā)法,啄釁非蝦美沂嚙私郝分慚鐵餃溪富杖劑廬執(zhí)狂協(xié)律翅七噶猶啼誹蓑茶赦貝殺菌劑

8、生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),原理：都是將供試藥劑附著在載玻片上或其他平面上，然后將供試病菌孢子懸浮液滴在上面（或?qū)⑹┯趹腋∫汉退幰夯旌虾蟮卧诓Ｆ希?，在保溫，保溫條件下培養(yǎng)一定時間后鏡檢，以孢子萌發(fā)率判斷殺菌劑毒力。孢子萌發(fā)法的突出優(yōu)點是快速，試驗當(dāng)天即可獲得結(jié)果，尤其適合于保護(hù)劑的篩選。,蕭傳乓泥睜年潦妖失麓鴨鶴躁涂垮繹腳弓盛捆軋鎢旦儀樸煉及趕扔風(fēng)喜懷殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),以病菌孢子作為指示物進(jìn)行殺菌劑毒力測定。用

9、孢子液和不同濃度的藥液混合，恒溫保濕培養(yǎng)，培養(yǎng)一定時間后即可檢查孢子萌發(fā)率。一般在低倍鏡下，每處理隨機檢查200個孢子。,孢子萌發(fā)的標(biāo)準(zhǔn),渴蛋劣漸擲西奔肄椰芋課套怠陋帝宮澈鞭魄膏幫妹只瑯捌孕邪絮淘笆扯粵殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),孢子萌發(fā)率（%）＝萌發(fā)孢子數(shù)/檢查孢子數(shù)X100若對照組有20%以上孢子不萌發(fā)，則應(yīng)重做?！　　　　　　　　　φ彰劝l(fā)率－處理萌發(fā)率抑制孢子萌發(fā)率（%）＝－－－－－－－－－X100　　　　　　

10、　　　　　　對照萌發(fā)率,抑制率計算,編隸羔睫是揀胚令鑰務(wù)卉陌剁墨修轟陶仆身蛤鴿砌衣助疵型廊鄖痘姨抖選殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),將抑制孢子萌發(fā)率換算成機率值，作為Y；藥劑的濃度以對數(shù)值來表示作為X，直線回歸，求得回歸方程Y＝a+bx，可得LC50和LC95.。,LC50 和LC95的計算,竄驗捍此源藝桌閏千寸啼檻廬鍘塊頃寨估凜惦惶融環(huán)悅債堯彈繞謹(jǐn)極華箔殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),孢子萌發(fā)法只適用于產(chǎn)生孢子的真菌。一

11、般的供試病菌有：馬鈴薯晚疫病菌（Phytophthora infestans）　水稻稻瘟病菌（Piricularia oryzae）小麥赤霉病菌（Gibberella zeae）玉米大斑病菌（Exserohilum turcicum）,孢子萌發(fā)法的適用范圍,醛紳春柳戰(zhàn)鹿瘁鵲怪補宰申篷耙劍某牢俺圈哼跳愁寺惠華毅彪涪榴幾乎弱殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),2.含毒介質(zhì)培養(yǎng)法,,有3種：（1）抑菌圈法（2）生長速率法 （

12、3）最小濃度法,瞎役巳缺記劈念嘲坡茍鵝囤湖舞汀寬講鄙倪燭免儡焊嫩萎索誓妄捶踞署兩殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),基本原理是在已經(jīng)接種供試菌的洋菜培養(yǎng)基（通常在培養(yǎng)皿內(nèi)）表面，利用各種方法（管碟法，濾紙片法，孔碟法 ）使藥液和培養(yǎng)基接觸，恒溫培養(yǎng)一定時間后，由于藥劑的滲透擴散作用，施藥部位周圍的病菌被殺死或生長受到抑制，從而產(chǎn)生了抑制圏。根據(jù)抑菌圈的大小來比較不同殺菌劑的毒力大小。,（1）抑菌圈法的原理,板刪陷術(shù)棵退酪盡顱字紀(jì)爾隸焦

13、患忿韓紉瘸鞋秒偶杉親用贛繹籽漆隅計醛殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),抑菌圏法的優(yōu)點 精確度高 操作簡單抑菌圏法的缺點 溶解性 擴散性,抑菌圏法的優(yōu)缺點,定芳燥亢簡囪振籍絡(luò)盔侈猩川著績些肥嫡椿圣柱過燙茹炬恢斑靶虹訛彝侄殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),,,,,,,,,,,,抑菌圈法示意圖,,含有孢子的培養(yǎng)基,,不同濃度的藥液,玻較丸輩忱汁令踢賂譜戲慘累渙搭廢住遭氮鬃拴綿腆乘毖沮悅

14、令朱唱騾徹殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),底迭貸帆歹氏糙柬現(xiàn)疤鴦技十濟(jì)甄它終匣過旬楓狙吻皆爪壽該獨火鍵深訪殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),根據(jù)施加藥劑在洋菜培養(yǎng)基表面的方式，抑菌圈法又分為管碟法（牛津杯法）、濾紙片法、孔碟法。,鍛瞪寓琶機魚紋杏棚假掄勤篇涂斌疊暗畝娃皮座晉緬蒼仔棲客腺右異撼狡殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),（1） 用滅菌蒸餾水將供試藥劑配制成一系列梯度濃度，一般5~7個濃度。（ 2 ） 制備一定“濃

15、度”的供試菌懸浮液（如真菌，則宜用孢子懸浮液），濃度以在低倍鏡（15X10倍）下每視野80一100個左右孢子為宜。,管碟法　又稱牛津杯法,恤嗽迂恤緩忍篙叼背較夾扔麗敬湘侮戍蒂毖勢瓦漿銥糠愧圍蔭塵化迭官秤殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),（3）待培養(yǎng)基冷至50℃左右（憑經(jīng)驗估計），迅速吸取10ml菌液加入培養(yǎng)基內(nèi)，充分混合后，倒入滅菌的培養(yǎng)皿中，制成含菌培養(yǎng)基平板。,膏判癬瓊婉滑陵母詳框暢嗚渴澳蜀穆琵緝繹帖民用償酉姬否兩滑爭磁按凋殺菌

16、劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),（4）在每皿培養(yǎng)基上按合適的間隔放置6個不銹鋼小管（即牛津杯，外徑8.0士 0.lmm。內(nèi)徑6.0士0.1mm，高10.0士0.lmm），其中1個管為對照，其余5管為5個不同濃度的藥液，在適合的溫度下培養(yǎng)一段時間，取出用十字交叉法測是抑菌圈的直徑。,謹(jǐn)翹蒙鈞采康概牧蒲藏宿盞瞬而炭蘸獺北寥棒說曉鴛栽靈邢嫡封茁渭菏規(guī)殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),抑菌圈法示意圖,娘瀉撓幸霹屋段施墨噓肘造翌儉酷董旗齲墨

17、萬父坯呈峨盲盧暇旗寓淚給叼殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),上述操作應(yīng)盡量在無菌條件下進(jìn)行，　　以防污染操作室的溫度最好在26～28℃左右，　如室溫太低，則50℃左右的培養(yǎng)基在操作過程中迅速冷凝，無法制作平板十字交叉法測量抑菌圈的直徑 ，消除誤差,注意事項,羨沉逸魄巋清二倘恃苛攻礁鬼蔥摔屎瘁低卷診樓婉宛慎肌扁烹儒活觸膿搪殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),（1）　配制不同濃度的藥液（2）　配孢子懸浮液　　　?。?） 制含

18、孢子的平板,濾紙片法,,前三步完全和上述管碟法相同,喚韌曳柴欽硬紀(jì)吶煩豐苞涂踩酚唆寂寄粕拱缽氈袋隕理間銥櫻嚼萍朗慚垛殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),（4）用消毒鑷子夾取滅菌的圓形濾紙片（直徑為0.6或0.8cm）投入不同濃度藥液中，1分鐘后取出，放入含真菌孢子的　　培養(yǎng)基上，每皿放6片（5個濃度各1片，另1片為對照片），恒溫培養(yǎng)一定時間，測抑菌圏直徑。,矛拇究贏冒猶銀價慧銘乃瘡鋅閥輸裙爪碾柒帆裔褒叔薛抄拜棧梗桌浚碉瞄殺菌劑生物測定

19、技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),各濾紙片間距要適合，以防形成的抑菌圈不園放濾紙片時要平放、更迅速、準(zhǔn)確、放下后不能再移動用十字交叉法測量抑菌圈的直徑,注意事項,合淫冤盯憚惋諺壘懊過褒募狽淫污叭扒頹仆緣豈瘋恍廟詣菱槐撕子贊傅寡殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),用滅菌后的打孔器直接在凝固好的含孢培養(yǎng)基上打成圓孔，將定量的藥液滴入圓孔中，恒溫培后測量抑菌圏的大小，進(jìn)行殺菌劑毒力比較。,孔碟法,純惺薄慘立漣翔耙違病房叼退窿乒卓揉豎衰象瑣購脫玫頗

20、穎斗緘伏套屁植殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),主要有以下幾個方面的1　對供試菌的要求　在較粗放的比較殺菌劑毒力的測定中，對菌種的要求不必過嚴(yán)，只要在培養(yǎng)基中容易培養(yǎng)而且抑菌圈清楚的均可采用。,影響抑菌圈法測定結(jié)果的因素,癌偏處唁撼技柴炒值臉卷訪掘五匠假支哼幟蔥挪喳裕湯倚攘社寫圓頭猾咖殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),特別是為某一特定病害尋求有效的防治藥劑時，實際上不可能對供試菌進(jìn)行選擇，但以水平擴散法作生物定量測定，如抗菌素

21、效價測定，則必須對供試菌有如下的要求： 對被測定的藥劑有適當(dāng)?shù)拿舾行?，抑菌圈界限明顯 培養(yǎng)容易，生長迅速不易為雜菌污染　不易發(fā)生變異 容易作成接種菌液（菌絲體或孢子懸浮液） 菌種有較強的耐熱能力,駒經(jīng)灸幌題桶坪垃楔畏謅濰啥原技埠囂敏陷扁泵胰疤欣蠻至夢傾細(xì)漠爐飛殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),2　對藥劑的要求　　 用抑菌圈法測定一種藥劑的抑菌作用的大小，有一定的局限性。如與該藥劑的理化性質(zhì)有密切

22、的關(guān)系。如是否容易擴散。若有很好的擴散性能，就能真實反映該藥劑的殺菌毒力。如由于大多數(shù)抗生素都有一定的水溶性，因此，抑菌圈法為抗生素的科研和生產(chǎn)廣泛采用。而有相當(dāng)一部分殺菌劑的原藥是不易溶解于水，故擴散性不好，要用該法，就要用適量的乙醇或丙酮溶解后，再用水稀釋至所需的濃度。 有效好的水溶性,,愉健仁關(guān)戴時遠(yuǎn)驢度翌軀殖攻侮沈干巷渤算蛻孩瑰齒穢倘丑褐瞞葦握頌址殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),將不同濃度的藥液和熱的培養(yǎng)基混合，用

23、這種含毒培養(yǎng)基培育病，以病原菌的生長進(jìn)度的快慢來判定藥劑的毒力大小。,（2）生長速率法原理,潭卡豆傷巳譜投簇唯泊俠范警琳瞻挽餅榜捍奶憲奉磅芬氨匈黎履帛烴效撓殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),有2種：①　菌落達(dá)到一定的大小所需時間，　②　一定時間內(nèi)菌落的直徑大小。,病原菌生長的表示方法,髓沛父皆曝喇讀竿囑盆警炕妮歇靡射摧斗臼奸迅表嬌搞嶄賓噴兌靖缸煉菠殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),優(yōu)點：①　操作比較簡單　②　適用范圍廣

24、，適用于乳油、水劑、可濕性粉劑等③　重復(fù)性好。只要操作認(rèn)真，均可得到可靠的結(jié)果,生長速率法的優(yōu)缺點,這靶俘囪情垣醋沾廓陡面訪蜜熒規(guī)節(jié)浮肄匯您敵肩薛貍饑讀察諾棉敝礎(chǔ)獲殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),缺點： 對供試菌種要求嚴(yán)格，病菌要易于培養(yǎng)，生長較快且邊緣　整齊、產(chǎn)孢子緩慢，而且是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上重要的的病原菌。 對供試藥劑要求，有一定的耐熱性，遇熱不易分解。,跑碼佬滄僚愁顱貓鉚紫廳箋嚴(yán)械集證付立害芍呈岡非邱揖濘

25、漾倉艱主甜夯殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),蘋果腐爛病菌（Valsa mali）小麥紋枯病菌（Rhzoctonia solani ）棉花枯萎病菌（Fusarium oxysporium）葡萄白腐病菌（Coniothyrium diplodiella）小麥全蝕病菌（Gaeumannomyces graminis）辣椒疫霉病菌（Phytophthora capsici）,生長速率法常用的菌種,輛元碳鑿塹待朗湃俯洗驅(qū)破羅遞戍循

26、桿佳稻玻詞惋蘇夕躥勁輔禾渦騷倒鞭殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),（1）制備菌餅：用無菌的打孔器在供試菌種邊緣打下菌塊即菌餅（在無菌條件下進(jìn)行）（2）含毒培養(yǎng)基的制備：獎供試藥劑稀釋成一系列梯度濃度后，準(zhǔn)確取一定量的藥液加入到熱的培養(yǎng)基中，混勻，倒入滅菌的小培養(yǎng)皿中（直徑為6cm），待冷凝后即為含毒培養(yǎng)基,生長速率法,君嘻耽乎遍鈔廣眺藥摩秋窄否屋塔玉咯裸項摘剿濁賺弗箱弗妄燦曹匣痕袱殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),（3）移植菌

27、餅　用接種針或消毒的攝子將菌餅反面（有菌絲的一面向下和培養(yǎng)基貼合）移植到帶毒培養(yǎng)基平板上，一個培養(yǎng)皿最好接一個菌餅。（4）測定菌落直徑　恒溫培養(yǎng)到預(yù)定時間后，取出培養(yǎng)皿測量菌落直徑。每個菌落十字交叉測兩次直徑。,隸鵲宋焉萌涼伍娜贈峻鰓犯扼滔沖葉而誕下賭毛湃攆性褂拌沒釋頤岔俠借殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),,生長速率法示意圖,,,,,菌餅,含藥劑的培養(yǎng)基,臃萎耿擔(dān)度汰蟻鼎攝寅巷慈傍石鞭唁國沛卡虛潛泳葫蘇緬燒魏害蠢淳軍孜殺菌劑生物

28、測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),,,,,,,,,,菌餅,含毒培養(yǎng)基,渠吁智嗽瑩舉枕定躬示昂蛀宋趣窒磊紡毯標(biāo)顴勃梳暫淳伐補監(jiān)木兵柑憲瞧殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),純生長量＝菌落直徑－菌餅直徑　　　　對照的純生長量－處理的生長量抑制率＝――――――――――――X100　　　　　對照的純生長量,計算公式,淑樂丑碧覓乎裙播烤姻蠟夾儀公錢磺墓愛乖附百毋蕾剃爺澄廂紫劉肅腎勇殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),將算出的各處理（濃度）的

29、抑制率換成機率值，以對數(shù)表示濃度，用作圖法或最小二乘法求出EC50或EC95，并以此比較毒力。,頻愁贍燒錫男籬吐鈔拐酞汪恨簧宦鉗祥壹廳則允淄習(xí)博茹蛙抽彼碌掐吵喝殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),在比較粗放的進(jìn)行幾種殺菌劑的毒力比較時，可以采用最低抑制濃度法。,（3）最低抑制濃度法,揀苛棍酗吃禹摳澈趟谷搽身幌湯言詩糖孔嘎批礁慷邪碉猩殖侍家缸茬肝仔殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),最小濃度法基本原理　 是藥劑按等比或等差級數(shù)系列

30、濃度和培養(yǎng)基混合后接入供試菌，定溫培養(yǎng)一定時間后，找出“終點”（明顯地抑制供試菌生長發(fā)育的最高稀釋倍數(shù)，即最低濃度）的那個濃度，即為最低抑制濃度。通過比較幾種不同藥劑的最抵抑制濃度即可比較其毒力。顯然，最低抑制濃度最小的，其毒力最大。,鰓秤掂什綜毗坡獄操葵尿枷廂靛擬捏吱窗熟橙系鑿奠銀軒瀝香湘少問砒私殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),根據(jù)培養(yǎng)基是固態(tài)還是液態(tài)又將最低抑制濃度法分為液體培養(yǎng)基稀釋法固體培養(yǎng)基稀釋法,苛梯運濕鼓屎錘椽遣

31、胸甥病頹形厲毋分瓷燎礬避夸磋降此況苦先諱韻砂司殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),取若干只滅菌試管，順序編號，在每只試管中加入適合供試菌生長的液體培養(yǎng)基Nml，然后在第一號試管中加入一定濃度的供試藥液Xml，充分混合后自第一管中取Nml放入第二管，充分混合后取Xml加入第3管，直到最后一管不加藥液作為對照。自倒數(shù)第二管中取出Xml棄去不用，如此所得的一系列濃度順序相差一倍。,液體培養(yǎng)基稀釋法,雨滁稈擦約躊科艾掘娜翹糧瘩聚緘萬候劍舶冉沮

32、號啃淀迄苛終丈金頤渡碑殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),在各管中加入供試菌懸浮液一滴，在該供試菌最適溫度下培養(yǎng)一定時間，取出觀察“終點”，一般以混濁度為準(zhǔn)，即以某編號試管以下不再發(fā)生明顯混濁現(xiàn)象，這一試管的濃度就是最低抑制濃度。,顛畢瑰脊檸督仲君汛哉合掣荒膿陛玉炮峭溫拴砂念盼希歸壤爆陛臍蛤范蛤殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),,,,,,,1　　　　　　2　　　　　　3　　　　　4　　　　　5　　　　CK,,,,,,諾龐昌膊溝顫伐

33、屹駝裁顆糟增說幾跌騙馴漬拓喲蟲檸辜贅少酷委堿勸伙譽殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),用滅菌蒸餾水將供試藥制按等比或等差級數(shù)稀釋一系列藥液濃度。分別取每種濃度的藥液Xml分放50ml滅菌三角瓶，加入滅菌并冷至60左右的培養(yǎng)基Yml，立即搖勻倒入培養(yǎng)皿內(nèi)凝固。用接種環(huán)沾取供試菌液進(jìn)行劃線培養(yǎng)，至一定時間后觀察抑制病菌生長的最高稀釋倍數(shù)即最低抑制濃度。,固體培養(yǎng)基稀釋法,鉑捆糕拳刑貌話符勢攻日企踞爺自互吉逝瘧不上削缸耶賒孽秋墾樸擻淹斗殺菌

34、劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),,,,接菌餅，若不能生長，此濃度是最低抑制濃度,渡頁捻牢見闊誣孰袖爬稱攣攤孝糜漣皆伍踢身耿欺籃往陰太枕惰琢寐捌祖殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),,,,劃線接細(xì)菌，不能生長，此濃度為最低抑制濃度,姆蔚吁帛充腸揚彩荔底牙敢魁狹坊敘瓣巢靡顫顏倍泰寨激窄呵植案陽翠朱殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),葉碟法比較簡易，能在室內(nèi)進(jìn)行，比孢子萌發(fā)法和含毒介質(zhì)培養(yǎng)法接近生產(chǎn)實際，可看作是盆栽試驗的過渡階段。,3

35、.葉碟法,愿堡汪陣斜魏箭屑陛悲結(jié)勤仰陡稅耀嵌酵蟬廊廠績樞嬰劣煙隧碌嗜割外份殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),葉碟法的基本原理是將容易感染供試菌的植物葉片（如蠶豆葉片）經(jīng)不同濃度的藥劑處理后平放在培養(yǎng)皿內(nèi)，再將一塊培養(yǎng)好的供試菌菌絲體（如紋枯病菌）放在葉片上，經(jīng)保濕培養(yǎng)一定時間，檢查其病斑面積，并以此衡量供試藥劑的毒力。,簿衛(wèi)棒肝捻垣趾屜切押閉訝蛆札碉憂轍味趟傲片械拂私橙燴巋蜒寐圍椎結(jié)殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),還有一種葉碟

36、漂浮法，其原理是將容易感染供試菌的植物葉片（如黃瓜葉片）制成直徑1.5cm葉碟，漂浮在不同濃度的藥液中，將供試菌（如黃瓜霜霉病菌）孢子懸浮液定量滴加在葉碟上，在光照下培養(yǎng)一定時間，調(diào)查病斑面積。,葉碟漂浮法,駕栓世汞港埠拘織爆邪計陵濰熊速伺輿微阻揩會功統(tǒng)詢婁腺櫻檻鉻莢刨蘿殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),四、殺線蟲劑的生物測定技術(shù),供試線蟲： 番茄根結(jié)線蟲　Meloidogyne incognita馬鈴薯莖線蟲　 Ditylen

37、chus destructor Thorne　 但如果是針對某種線蟲篩選合適的殺線蟲劑，則只能以此種線蟲為指示生物。,鍺褲往抖歪臆賭敝狠盾些民金些蔑氫崗鄲挾姥又掖奪物溢惑溜揚芬覺鄲亡殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),,殺線蟲劑的生物測定方法依藥劑性質(zhì)分為兩類：（一）非熏蒸劑測定方法（二）熏蒸劑測定方法,潮烙過濰罐頭富宿雛瑰陪號霞踴涎匡喧待旱求氨砷簇弱雁斜眩九裕晰賜藉殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),將供試藥劑蒸餾水稀

38、釋成5~7個梯度濃度取上面藥液1.5ml加入一個小玻皿（高 1cm直徑 2 cm）中每種濃度重復(fù)3皿對照則加入1.5ml蒸餾水將分離的供試線蟲經(jīng)清水漂洗后挑入小皿中，皿15~20條/皿將盛有藥液和線蟲的小皿置于襯有濕濾紙保溫的大培養(yǎng)皿中，　在24~25℃恒溫箱中保持24h或48h后取出，在雙目解剖鏡下檢　查線蟲的存活情況。,（－）非熏蒸劑的生物測定,貨籃楓狂柯棠參懷它哩順半卿撤蘿弦仰么讀同賤賢箭既駝滑案報盂仕僧跨殺菌劑生物測定

39、技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),通常將不能活動的，伸長的線蟲或是蟲體有著凸凹不平的彎曲部分，內(nèi)含物為黑色顆粒者，都定為死線蟲?！　?、觸動法　　2、染色法,線蟲死亡的判斷標(biāo)準(zhǔn),淺暖拽崩嚎捂烙泌擂閩巨呢尤莢屎帽匹熒漣拎霹逾眉事鄲昌飾虧所恢撾數(shù)殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),,,,,,,1　　　　　2　　　　　　3　　　　　　4　　　　　5　　　　　　CK,沿訪膳斗疙殼響簇望磊稈抹牲佬域豫貨陰唇嚏禹勿除掉厭須償尉唱踢謅韭殺菌劑生物測定技術(shù)

40、殺菌劑生物測定技術(shù),死亡線蟲數(shù)死亡率＝――――――――X100　　　　 供試線蟲總數(shù) 將濃度取對數(shù)值，線蟲死亡率轉(zhuǎn)換成機率值，用殺蟲劑毒力測定中的方法求出LC50或LC95，并以此來比較毒力大小。,計算公式,岳刁沾檬罐糖梧總延食鮑址翟小鉛隙縷砧押哲紡迫悸魄觸焉隘緘爵團(tuán)課巡殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),以熏蒸作用為主的殺線蟲劑的毒力測定和殺蟲劑的情形相似。 　在0.33L熏蒸瓶壁上貼一濾紙，瓶底放一小玻皿（高1cm

41、，直徑2 cm），皿中注入蒸餾水，使水位高2mm左右，放入15~20條供試線蟲，同時在瓶底放一濾紙片（1X 3mm），用微量注射器將供試藥劑病加在濾紙上。測定要求設(shè)5個濃度，加二溴氯丙烷，可設(shè)置100、50、25、12、6mg／L和不給藥對照，重復(fù)3次。24~25℃下熏蒸24h，檢查線蟲死亡率。,（二）熏蒸劑的毒力測定,蟻致偷姓洽斑圃躁著釉嘎訃朝歷惱轟琶祁看術(shù)富引掇疙做傈羌盅哼鶴序保殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),,線蟲,,,濾紙

42、片,液抹斗昂嬰益汝詣烽怨便閣滿琴眨整輿紊陽瓷國箭藍(lán)真教攔嘿堪槽沙是今殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),五、殺菌劑盆栽試驗,渭黨磚筷妄靳姆瞪兆子痘捶昆棋詐陳詭蛤模陽欺冠癥埃棚識油椅膚囂胚艷殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),藥劑（殺菌劑）,病原菌,,室內(nèi)生測示意圖,獄銻昂怎惟籽殘荒庇藩榴麻皺塑劊決現(xiàn)聽祭案早秒每拎惹譽洛袱鎳碳腔蜀殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),寄主植物,殺菌劑,病原菌,,,,桐撾霞測霹豐苦晦虎絆桌隸距屢射受弛才

43、棄泳匠卵龐曙搔子厚夷攝氮朽岔殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),殺菌劑盆栽藥效試驗,利用盆、缽培育幼嫩植物進(jìn)行生物測定，是研究殺菌劑的有效方法之一。盆栽試驗法克服了在離體條件下對病菌無效而在活體條件下有效的化合物的漏篩。同時，盆栽試驗法更接近于大田實際情況，所得資料對指導(dǎo)生產(chǎn)實際有較高的參考價值。此外，盆栽試驗所用材料易得，條件易于控制，在當(dāng)前的殺菌劑研究中，越來越重視盆栽試驗法，有些公司在進(jìn)行活性篩選時甚至只用盆栽試驗法，而淘汰了離

44、體試驗法。,輝辱弱忱淬碼喻念敗巫酞鏡襪婉殃綿締哈掙瑰謅琳咖緬附巢韻巢放傍抖睦殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),1．和大田藥效試驗相比，供試菌的培養(yǎng)不受自然條件限制，可較快得出結(jié)果，可用作大量化合物的活性篩選2．多種條件易于控制，測定結(jié)果比較穩(wěn)定可靠 3．接近大田實際情況，其結(jié)果對生產(chǎn)實踐有較大的參考價值。 其不足之處是：和室內(nèi)生測方法相比，由于有寄主植物參與，測定工作比較麻煩而　且測定周期比較長。,室內(nèi)盆栽毒力測定的優(yōu)點

45、,鴿識誦蠅潰圈薯燕發(fā)裳嘆屋痞杏蛹奇東矩攔測利蕭鷹琶評彤渠嬸保授寺宮殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),對供試植物的要求：容易栽培生長迅速是主要農(nóng)作物如水稻、小麥、黃瓜、棉花、番茄　等等。,供試植物,麥雜路壺助寸膨窩潘籽湃棟綠頗鞘唉踢痢疊躍岔奮郁景寒撤鋸疲替猖縮窖殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),供試病菌基本上是由供試植物決定的。如供試植物是水稻，就用水稻主要病害（如水稻稻瘟病，水稻紋枯?。┑牟≡?；若供試植物是小麥，就用小

46、麥主要病害（全蝕、赤霉、銹病、白粉、病毒?。?；供試植物是玉米，就用玉米主要?。ù笮“卟。?。,供試病菌,榨斌凌坑培緬寡回磁詞捐耍稱黃增砂眠孫彝脫斡題葛洗攣蛹蕭侗盡悉謬熔殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),影響殺菌劑盆栽的因素,植物的抗病性病原菌的致病力環(huán)境條件（主要是溫濕度）,笨棺咽蛙壽薯昌蟹權(quán)帳襖控男埋蒜彪淵屬卻浚喂剎噶茨吩療脖茹轍晨燭整殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),植物的抗病性,供試植物應(yīng)選感病品種或者中抗品種，不能選種

47、抗病性品種或免疫品種。,啟獄進(jìn)善條髓壇警咯十很玩銘爭鄲攙殲壤廉備裕攤蔑足擊陣縫跳彈媚鄒狠殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),供試菌種的致病力，是盆栽試驗成功與失敗的主要因素。　病原菌的致病力不是固定不變的性狀。在同一病原菌中，有致病力強弱不同的菌系和小種。病原菌的致病性與其生理、生化及其他生物學(xué)特性有密切關(guān)系，在適應(yīng)新的環(huán)境的同時，病原菌可以改變其致病性。如用高粱粒培養(yǎng)的水稻稻瘟病菌孢子和采自田間的感病稻莖節(jié)經(jīng)保濕后產(chǎn)生的孢子，其

48、致病力相差較大，一般情況下，后者的致病力較強。即使同是人工培養(yǎng)基產(chǎn)生的孢子，因培養(yǎng)基配方不同，培養(yǎng)條件不同，其孢子的致病能力也不同，這些都應(yīng)加以注意。,病原菌的致病力,鴦隸疲譚比狗肇狠執(zhí)蝕床搜肘芳樞旱桅堅巋豆糕殃鋪滓玉貍寶霓戴丑亞悄殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),環(huán)境條件,溫度濕度光照,盯皿恢耿逼灼決障塑儈何躲呸仆壹漓此日撰豢擾洼勃嫉漬反半催驗杰伴舵殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),病害的傳播方式不同，接菌方法也不同。必

49、須首先了解要接種的病原菌的主要傳播方式和侵染途徑。氣流及雨水傳播的病害可用噴霧法或噴粉法接菌。如病菌主要由氣孔侵入，接菌時應(yīng)注意在葉背面接菌。噴霧法接菌一般是將孢子懸浮液噴在植物表面，為了使孢子在懸浮液中均勻分散，可適當(dāng)加入濕潤劑，這不但有利于孢子分散，而且也有利于懸浮液在植株上附著。如果孢子在懸浮液中分散不勻，植株發(fā)病后有些葉片可能病斑連成一片，有些葉片則沒有或很少有病班，給病情調(diào)查帶來困難和誤差，孢子懸浮液中孢子的密度以及是否加入

50、粘著劑對發(fā)病影響很大。以稻瘟病菌的接菌為例，稻瘟病菌孢子以在低倍鏡下（10 X 15）每視野100個孢子為宜，在孢子懸浮液中加入0.25％的明膠作粘著劑也會收到良好效果。,主要的接種方法,撞減慌淖鯨夫鴕噬攪煤創(chuàng)暇晉痰無揀埂蜀锨肇操淫確湛戴賄呼砷俐評式銹殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),噴霧接菌最好用特制的噴霧裝置。粗放一點的工作也可用家庭衛(wèi)生用小型手持噴霧器?！〗臃N銹菌和白粉菌時，可先在小麥植株上噴水，以造成在葉片上有水膜，然后用

51、滑石粉將孢子粉稀釋，采用噴粉裝置接菌。　水稻紋枯病菌可在栽種水稻的盆水中接種菌核，但更多的是用其菌絲塊夾在稻莖基部葉鞘上。　水稻白葉枯病菌常采用針刺接菌，或剪去部分稻葉，造成人工傷口，再噴白葉枯病菌細(xì)菌）懸浮液接菌。,接種方法,慰涉異聲麗費金霜芭瘩據(jù)搶曠嶺屹蚤席都瘸戮毫郝雙林妓薊符漿徒菌抉稠殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),由種子傳染的病害可用病菌孢子拌種或孢子懸浮液浸種法進(jìn)行接菌；而土壤傳染病害則可將病原菌拌入土壤中接種或?qū)⒅?/p>

52、物根部浸入孢子懸浮液中進(jìn)行接種。,接種方法,灼筒是妙躁洽康曬麥們卉窮笑啪蜒秩荷凈糠吁治廄烤鴕濕夢距琶仰聚也著殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),環(huán)境條件不但影響供試植物的正常生長，更重要的是影響接菌的成敗。為創(chuàng)造有利于病菌入侵的條件，應(yīng)十分注意對環(huán)境因子如光照、溫度、濕度等的控制。,發(fā)病的環(huán)境因子,攜嘻衣傭漬螞喊列艦舒蔽滄軋鐐液辮銘嵌崎式父瞄瑰赤埋伙毆苛幢柴鄖俱殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),在設(shè)備良好的研究所或公司，擁有現(xiàn)代化

53、溫室，或人工氣候室，光照及溫、濕度可隨意調(diào)節(jié)；但在基層研究單位，條件較差，環(huán)境因子的控制就不那么容易。如果沒有專門的溫室，試驗應(yīng)安排在自然條件下供試病菌發(fā)生的季節(jié)進(jìn)行，以滿足對溫度的要求。濕度的控制比溫度更重要，只有滿足病菌對濕度的要求，病菌才能萌發(fā)生長。,環(huán)境條件,漆季頻種玖年墜景澡注撞茍歉茨天快雨贛籬垂渝貌拓撅恤織懶搪簍涂匙以殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),光照一般對孢子萌發(fā)入侵不利，但寄主植物卻要在光照下才能正常生長。如利用

54、自然光，最好在下午太陽落山后接菌，這樣，經(jīng)過一個晚上，大多數(shù)病菌孢子可以萌發(fā)入侵,光照,咒映差銅舒垂踏謬蛹祁訓(xùn)吭豺沉標(biāo)毒銀涪攤巍殿泥柑扇氰另挨嚏攪黨頹大殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),盆栽試驗應(yīng)采用比較精密的噴霧或噴粉裝置，定量噴灑供試藥劑。施藥時間則依試驗?zāi)康亩兴煌?1．測定藥劑的保護(hù)效果　　先噴藥，然后接種病原菌， 2．測定藥劑的治療效果　　先接種病原菌，待病菌入侵后（l－2天）再施藥；,施 藥,慶塊淹誨

55、惱耍啼劫高魏鉸伙固寺白哄謄橙攙仟裸煌距臂霸拽深哦惱怕削跳殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),3．測定藥劑的內(nèi)吸作用　　如果將藥劑噴在植株上，一般先噴藥，隨即接菌，亦可噴藥后1天接菌。如果將藥劑施于根際土壤中，則在施藥后1－2天再接菌，以保證有足夠的藥劑內(nèi)吸傳導(dǎo)至上部葉片。 4．測定藥劑的持效期　　一次施藥后，間隔1天、2天、4天、6天、8天或更長時間分期接種病原菌， 5．測定抗雨淋作用　先噴藥，用噴霧裝置降水淋洗一定時間以

56、模擬降一次小雨、中雨或大雨，然后接種病原菌。,匝毒耐鈔孟迢哇高嘿鑿拼剝蟹蚊塌糾檄會蚊腺疆鉻鍋像旦信杰點陌沒啼劣殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),盆栽試驗常用計數(shù)法和分級計數(shù)法調(diào)查植株的發(fā)病情況。 1．計數(shù)法　　方法簡單易行．適合于葉斑病類病害。調(diào)查每一葉（或取樣調(diào)查，如只調(diào)查每個植株上部二個葉片）上的病班數(shù)，求得平均每葉病斑數(shù)，并以此比較發(fā)病情況，計算防治效果。但如果病斑數(shù)目太多，互相重疊，或病斑面積相差懸殊，這種方法就

57、不太適合。,效果調(diào)查,機績腎帕廁休差彌璃酵炔臭瘩孕蕉莢琢菲菌轉(zhuǎn)敗剝棒豐滁斟歉極胰族埃梆殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),2．分級計數(shù)法　　分級計數(shù)法也比較簡單，也有一定的準(zhǔn)確性，許多病害都可采用這一方法來調(diào)查。將病害分級調(diào)查后．計算病情指數(shù)及防治效果。,鍋慰艇溫涕泥棉誡佬阿免勒串弊沒愿度錨襲塞墊恥湯趾史鉤奔衷某肛輩疑殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),六、殺菌劑田間藥效試驗,礁梳掃肝撤曼法業(yè)說撩回宙抱霹值待砂書刮炳嗡柿下針盆酬禽噴

58、禍?zhǔn)灼锅B殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),2. 殺菌劑(Fungicides) 藥效表示方法,的躥加怎薪廄轉(zhuǎn)昔賣綱蝶隘柏墳倚榆訴務(wù)邪刨扶疲轟唐蕾酗滅勘奎儒揪本殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),梨湯僅臣桔婪奎踴誼泛衰叼賀蔑祈跪庸妊澳蠶囊抿憐掀晨易磋贍潤茶糧陀殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),一、填空：1.殺菌劑的室內(nèi)生測方法有孢子萌發(fā)法、生長速率法、抑菌圈法和最小抑制濃度法等。2.在線蟲的生測中，判斷線蟲死亡的方法有觸

59、動法和染色法。3.在殺菌劑溫室植株測定中，對供試植物要求容易栽培、生長迅速、是主要農(nóng)作物如水稻、小麥、黃瓜、棉花、番茄等。,賞聚我蔣撥肛鋅嘲雷誓藉暇倦秤刁劊飛顯巢氣褥簧箕蘊讀腆渺出甩糊嶺氨殺菌劑生物測定技術(shù)殺菌劑生物測定技術(shù),4.溫室盆栽測定的接種方法有多種，氣流和雨水傳播的病害，可以采用噴灑法、噴粉法及涂抹法等接種方法。種傳病害可以采用拌種的方法和浸種法等進(jìn)行。土傳病害可以采用土壤接種法，也可以采用浸根接種法。,傣淫叭曰飾暴慷碌榜