再生靜電紡絲素納米纖維在面神經(jīng)修復中作用的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 研究再生靜電紡絲素納米纖維導管能否為面神經(jīng)修復提供適宜的再生微環(huán)境，促進和引導面神經(jīng)再生，探討其成為面神經(jīng)缺損橋接替代物的可行性，為臨床應用提供實驗依據(jù)。
　　 方法：
　　 首先采用靜電紡絲方法制備再生絲素納米纖維網(wǎng)：直徑305±84nm，呈纖維狀三維立體結構，纖維分布均勻橫向排列；其次制備再生靜電紡絲素納米纖維導管：導管內(nèi)徑1.5mm，0.2mm厚。最后上述材料經(jīng)乙醇處理、蒸餾水三次洗滌和輻照后

2、備用。1．體外實驗：施旺細胞培養(yǎng)：取出生1～2d的新生SD大鼠背根脊神經(jīng)節(jié)(DRG)，Hanks緩沖液內(nèi)剝離外膜，雙酶消化后以1×105/孔密度接種在制備好的絲素蛋白膜(SF)和多聚賴氨酸(PLL)包被的35mm培養(yǎng)皿上，倒置相差、激光共聚焦、掃描電子顯微鏡下觀察施旺細胞粘附、生長、遷移情況，并分別對施旺細胞增殖活力(MTT試驗)及其分泌三種神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF、BDNF、NGF)的蛋白表達水平(ELISA)進行測試。2．體內(nèi)實驗：建

3、立SD大鼠面神經(jīng)損傷修復模型：橫斷右側(cè)面神經(jīng)形成5mm缺損；自體面神經(jīng)、再生靜電紡絲素納米纖維導管分別橋接5mm缺損的面神經(jīng),3月后進行再生面神經(jīng)功能評估，包括Flurogold(FG)逆行追蹤、面神經(jīng)電生理測試及再生髓鞘厚度、直徑的測定。
　　 結果：
　　 1．從倒置相差、激光共聚焦、掃描電子顯微鏡結果來看：與對照組(PLL)相比,305nm再生靜電紡絲素納米纖維更適合大鼠施旺細胞的貼附、增殖、生長，對細胞遷移起引導

4、作用，在靜電紡絲素蛋白納米纖維上施旺細胞間的排列更有序、細胞突起彼此能夠形成更廣泛、復雜的網(wǎng)狀突觸連接；而因為沒有絲素蛋白納米纖維支持，在PLL上的細胞排列相對簡單、分布隨機，突觸間連接距離相對短；MTT和ELISA結果表明該材料對施旺細胞增殖活力及分泌三種神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF、BDNF、NGF)的功能沒有影響。2．該材料制成的導管植入SD大鼠體內(nèi)無明顯不良反應,3個月就已經(jīng)完全被吸收降解，缺損的面神經(jīng)穿過導管重新連接在一起；從移植3

5、月后進行神經(jīng)電圖(ENOG）所監(jiān)測面神經(jīng)復合動作電位(CMAPs)的波幅及潛伏期變化情況，可以看到面神經(jīng)功能得到一定程度的恢復，盡管材料組的CMAPs波幅明顯低于正常對照組，但與自體面神經(jīng)移植組相比，CMAPs波幅和潛伏期方面沒有顯著統(tǒng)計學差異(P＞0.05)；超微結構發(fā)現(xiàn)兩實驗組再生髓鞘的厚度和直徑無顯著統(tǒng)計學差異(P＞0.05)；我們在材料及自體面神經(jīng)移植組移植同側(cè)的大鼠腦干面神經(jīng)核團內(nèi)發(fā)現(xiàn)熒光金逆行示蹤劑出現(xiàn)，而陰性對照組（神經(jīng)切

6、斷未再生）的面神經(jīng)核團內(nèi)未見熒光金逆行示蹤劑出現(xiàn)，比較兩實驗組有熒光金標記的面運動神經(jīng)元數(shù)量無顯著性統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　 結論：
　　 再生靜電紡絲素納米纖維能夠為施旺細胞的黏附、生長、遷移提供良好的生長表面，絲素纖維的分布與走向?qū)毎酿じ?、鋪展、分布、突起方向及遷移起引導作用，從而為神經(jīng)軸突的生長提供更適宜的生長通道，引導和促進軸突的定向生長；靜電紡絲素納米纖維導管能引導再生面神經(jīng)通過缺損區(qū)域與遠端連接