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文檔簡介
1、本實驗以溫敏核不育水稻廣占63s為實驗材料,研究了在水稻育性敏感期對其進(jìn)行低溫(22℃)處理后水稻育性的變化,并與高溫(>26℃)對照下的水稻育性進(jìn)行對比,將育性差異較大的一組水稻幼穗蛋白采用雙向電泳技術(shù)進(jìn)行分離,找出差異蛋白,并將這些差異蛋白進(jìn)行MALDI-TOF-MS鑒定和功能預(yù)測。主要結(jié)果如下: 1、與高溫對照組相比,在水稻育性轉(zhuǎn)換敏感期(即雌雄蕊形成期至花粉母細(xì)胞形成期)進(jìn)行低溫處理,其水稻育性顯著提高。高溫處理組(即大
2、于26℃高溫處理)水稻的育性僅為1%,而同時低溫處理(22℃)的水稻育性高達(dá)25.7%。 2、建立和優(yōu)化了一套適合實驗室條件下幼穗全蛋白分離、鑒定的雙向電泳方法。采用IPG膠條進(jìn)行第一向電泳,上樣量為200μg,水化時間為12hr,然后500V電泳1hr,再1hr梯度上升到1000V,后3hr梯度上升到8000V,8000V穩(wěn)定2.5hr即20000Vhr,共約34700Vhr。第二向電泳為連續(xù)的SDS—PAGE,凝膠濃度為12
3、.5%。通過銀染顯色,獲得了分辨率和重復(fù)性較好的雙向電泳圖譜。 3、本研究對育性差異較大的兩組水稻幼穗蛋白采用雙向電泳技術(shù)進(jìn)行分離,結(jié)合PDQuest7.4 2D膠分析,在24×18 cm大小的膠上可檢測到約800個蛋白質(zhì)點。高溫處理膠和低溫處理膠相比,檢測到差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點數(shù)共為147個,將差異點蛋白經(jīng)過酶解和基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜(matrix assisted laserdesormion/ionization
4、 time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)進(jìn)行了肽質(zhì)指紋圖分析,通過采用Mascot軟件對MSDB數(shù)據(jù)庫進(jìn)行查詢和分析,其中14個蛋白質(zhì)點得到了鑒定。鑒定的差異蛋白質(zhì)中,第Ⅴ期可育水稻中表達(dá)量上調(diào)的蛋白有:烯醇酶(2-磷酸甘油酸鹽(或酯)脫水酶),磷酸丙糖異構(gòu)酶,線粒體F1-ATP酶;第Ⅴ期可育水稻特異表達(dá)的蛋白為小麥中組蛋白H<,2>B同源蛋白。第Ⅵ期可育水稻中表達(dá)量上調(diào)的蛋白有:咖
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