水稻條紋病毒對(duì)灰飛虱胚胎發(fā)育的影響.pdf

1、水稻條紋病毒（Rice stripe virus，RSV）是纖細(xì)病毒屬（Tenuivirus）的典型成員，其引發(fā)的水稻條紋葉枯病是水稻上的重要病害之一，該病害在我國(guó)分布廣泛，給水稻生產(chǎn)帶來(lái)了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失?；绎w虱（Laodelphax striatellus Fallén）作為RSV的主要傳播介體，以持久性經(jīng)卵方式傳毒。研究RSV與介體灰飛虱的互作機(jī)制，對(duì)于切斷灰飛虱傳毒、控制條紋葉枯病具有關(guān)鍵的作用。本實(shí)驗(yàn)室先前研究表明，RSV對(duì)灰飛

2、虱的后代生活力有不利影響，即帶毒灰飛虱的后代孵化率降低，且發(fā)育歷期延長(zhǎng)。本研究在此基礎(chǔ)上，以灰飛虱的卵為研究對(duì)象，從生物學(xué)和分子生物學(xué)兩方面初步分析了RSV影響灰飛虱后代發(fā)育的原因。
　　針對(duì)RSV影響灰飛虱后代孵化率的這種現(xiàn)象，本研究利用顯微鏡觀察帶毒(RSV)灰飛虱F1代卵的形態(tài)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)F1代卵中出現(xiàn)很多發(fā)育遲緩的卵，部分卵的發(fā)育與無(wú)毒灰飛虱的卵相比明顯變緩，而有些卵形態(tài)出現(xiàn)異常（如滯育、畸形、黑化、腐爛），無(wú)法像正常卵一樣

3、順利經(jīng)過(guò)孵化期孵化為幼蟲(chóng)，最終導(dǎo)致孵化率的降低。
　　為了證明RSV在灰飛虱的卵內(nèi)復(fù)制增殖的事實(shí)，本研究提取高親和性帶毒灰飛虱F1代卵不同發(fā)育階段的RNA，利用Real-time PCR方法檢測(cè)RSV CP的含量，結(jié)果顯示，帶毒灰飛虱F1代卵內(nèi)CP的相對(duì)表達(dá)量隨著卵的發(fā)育而不斷增加。同時(shí)，為進(jìn)一步證明RSV在卵內(nèi)的增殖，提取帶毒灰飛虱F1代卵的蛋白，利用Western blot來(lái)檢測(cè)卵內(nèi)的結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白，蛋白印跡表明，外殼蛋

4、白CP(35.0 kDa)和病害特異性蛋白SP(20.5 kDa)均在帶毒灰飛虱的卵內(nèi)表達(dá)。以上研究結(jié)果都證實(shí)了RSV可以在灰飛虱卵內(nèi)進(jìn)行復(fù)制增殖。
　　為了揭示RSV影響灰飛虱后代的孵化的原因，本研究以帶毒和無(wú)毒灰飛虱的F，代卵為研究對(duì)象，利用Real-time PCR方法比較分析了卵內(nèi)17個(gè)胚胎發(fā)育相關(guān)基因的相對(duì)表達(dá)量差異。結(jié)果顯示，deaf1、atpa、chorp、fd64a、ddxl和lar6個(gè)基因在在帶毒灰飛虱F1代卵中