白術(shù)黃芪方治療大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的研究及其對鳥氨酸脫羧酶的影響.pdf

1、研究背景和目的“益氣健脾”是中醫(yī)治療脾虛證的重要治法。脾虛往往伴有胃腸黏膜的損傷。益氣健脾中藥對脾虛證的治療作用之一可能是促進(jìn)胃腸黏膜保護(hù)或者修復(fù)。 本實驗室前期工作中在小腸隱窩干細(xì)胞(IEC-6)上以鳥氨酸脫羧酶(ODC)表達(dá)和多胺水平等為指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)白術(shù)、黃芪和甘草不同提取部位可以促進(jìn)IEC-6細(xì)胞增殖、移行和分化。古方白術(shù)黃芪湯由白術(shù)、黃芪和甘草組成，將篩選出來的三藥有效部位白術(shù)AMPS-Ⅱ、黃芪總皂苷、甘草總黃酮組成白術(shù)黃

2、芪方。本研究以潰瘍性結(jié)腸炎(UC)作為腸黏膜損傷的模型，觀察該方的作用和ODC的變化，研究益氣健脾中藥的作用機(jī)理。 研究方法1.以不同造模方案建立TNBS致UC動物模型。 2.UC大鼠分為模型對照組、陽性藥組、白術(shù)黃芪方0.1g/kg、0.2g/kg、0.4g/kg組，灌胃給藥14天后處死，通過比較大鼠一般狀態(tài)、結(jié)腸大體形態(tài)和病理檢測結(jié)果，得出白術(shù)黃芪方的有效劑量。 3.比較白術(shù)黃芪湯水提液(15g生藥/kg)和

3、白術(shù)黃芪方(0.3g提取物/kg)治療大鼠UC的作用，造模后給藥14天處死，觀察一般狀態(tài)、結(jié)腸大體形態(tài)和組織病理改變等。 4.UC大鼠分為模型組和白術(shù)黃芪方組，兩組各在造模10天、20天、30天分三批處死，觀察各時期大鼠整體狀態(tài)和結(jié)腸的改變，以了解UC的病理演變過程及白術(shù)黃芪方的治療作用。檢測ODC的表達(dá)在UC病變過程中的改變及藥物的影響。 5.通過小鼠炭末排出實驗、濕糞點數(shù)、二甲苯致炎、醋酸扭體實驗等觀察白術(shù)黃芪方對胃

4、腸運(yùn)動的的影響及抗炎、鎮(zhèn)痛效果等。并在小鼠結(jié)腸炎模型上觀察髓過氧化物酶的影響。 6.白術(shù)黃芪湯水提液和白術(shù)黃芪方提取物急性毒性實驗。 結(jié)果1.TNBS致UC動物模型所受影響因素較多，例如動物體重、TNBS劑量、造模天數(shù)等，應(yīng)在每次正式實驗前做預(yù)實驗，以確定造模方案。 2.白術(shù)黃芪方治療大鼠UC在0.4g/kg劑量有效。 3.白術(shù)黃芪方提取物治療大鼠UC的效果優(yōu)于白術(shù)黃芪湯水提液。 4.觀察白術(shù)黃芪

5、方提取物在造模10天、20天、30天潰結(jié)病變不同階段的治療作用。大鼠在三個階段的病理變化有明顯差異，第7天時最嚴(yán)重；第10天時多見腸段組織壞死，鏡下可見病灶處黏膜層缺失，炎細(xì)胞明顯浸潤；之后體重上升，動物排稀便較多，結(jié)腸潰瘍多見；20天后進(jìn)入緩解期，肉眼可見瘢痕組織形成，鏡下可見肉芽組織增生，病變開始恢復(fù)。白術(shù)黃芪方治療作用主要在慢性炎癥階段有效。 5.ODC主要表達(dá)在結(jié)腸黏膜層，正常情況下幾乎不表達(dá)，損傷過于嚴(yán)重黏膜全部缺失炎

6、細(xì)胞明顯浸潤時也無表達(dá)，損傷后修復(fù)時表達(dá)較強(qiáng)。其表達(dá)與病變程度相關(guān)，在一定情況下，病理損傷輕其表達(dá)少，反之則表達(dá)多。ODC可以作為觀察結(jié)腸黏膜病變程度的一個指標(biāo)。 6.白術(shù)黃芪方還能減慢正常小鼠胃腸運(yùn)動、減少冰乙酸所致小鼠扭體次數(shù)、減輕小鼠二甲苯所致急性炎癥、降低小鼠皮下包埋濾紙引起的慢性炎癥、降低結(jié)腸炎小鼠MPO活性，有調(diào)整胃腸運(yùn)動、鎮(zhèn)痛和抗急、慢性炎癥的作用。 7.白術(shù)黃芪湯和白術(shù)黃芪方一次最大耐受量分別為60g生藥