乙肝丙肝PBMC中ZIP2和ZIP8的表達(dá)及HBV對(duì)THP-1中ZIP2和ZIP8表達(dá)的影響.pdf

1、研究背景:
　　鋅是生物體所必須的微量元素之一，是機(jī)體多種酶的必需組分或激活因子，與機(jī)體發(fā)育、骨骼生長、免疫功能、內(nèi)分泌調(diào)節(jié)、蛋白質(zhì)和核酸代謝等一系列生理活動(dòng)密切相關(guān)。鋅缺乏可以造成多系統(tǒng)的損害，鋅離子代謝的穩(wěn)態(tài)平衡對(duì)維持機(jī)體正常生理功能至關(guān)重要。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，近年來已發(fā)現(xiàn)哺乳動(dòng)物中存在兩個(gè)重要鋅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族直接參與細(xì)胞內(nèi)鋅離子的穩(wěn)態(tài)代謝，即SLC39A(solute-linked carrier39A，SLC39

2、A)和SLC30A(solute-linkedcarrier30A，SLC30A)兩大家族。SLC39A基因家族也被命名為ZIP(ZRT,IRT-like protein，ZIP)家族。而SLC30A基因家族又被稱ZnT(zinc transporter1，ZnT)家族。SLC39A和SLC30A兩個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族分別參與了鋅離子轉(zhuǎn)進(jìn)和轉(zhuǎn)出細(xì)胞的運(yùn)輸過程。兩大家族鋅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在各種亞細(xì)胞器、細(xì)胞及器官中的分布不同，具有一定的組織特異性。越來

3、越多的證據(jù)表明SLC39A和SLC30A兩大家族不僅直接參與了細(xì)胞的鋅離子穩(wěn)態(tài)代謝，同時(shí)還通過復(fù)雜的機(jī)制參與腫瘤和糖尿病等疾病的發(fā)生和發(fā)展，它們逐漸成為鋅營養(yǎng)和代謝疾病的研究熱點(diǎn)。
　　人類ZIP2是首先被報(bào)道的哺乳動(dòng)物SLC39A家族成員。hZIP2組織表達(dá)較低且局限，僅在前列腺、子宮、子宮頸上皮、視神經(jīng)及單核細(xì)胞中表達(dá)。而用鋅螯合劑TPEN處理人THP-1單核細(xì)胞系或人外周血單核細(xì)胞造成缺鋅細(xì)胞模型，發(fā)現(xiàn)其hZIP2 mRNA

4、表達(dá)明顯增加，提示人hZIP2轉(zhuǎn)錄表達(dá)受鋅離子調(diào)控。ZIP8與炎癥免疫關(guān)系密切。ZIP8表達(dá)下降可降低胞內(nèi)鋅含量，損害線粒體功能，從而引起細(xì)胞大量死亡。另外，ZIP8在人類T細(xì)胞中表達(dá)較高，當(dāng)有外界刺激時(shí)， T細(xì)胞中ZIP8表達(dá)明顯升高，該蛋白可通過調(diào)控鋅在溶酶體內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)從而調(diào)控T細(xì)胞γ-干擾素的表達(dá)。
　　乙型肝炎病毒(HBV)感染慢性化以及其慢性持續(xù)感染的確切機(jī)制尚未完全明了，大多學(xué)者認(rèn)為宿主免疫系統(tǒng)與病毒相互作用這一因素是乙

5、型肝炎病毒感染慢性化的重要原因。在HBV持續(xù)感染患者中，不能產(chǎn)生有效的針對(duì)HBV的特異性細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞反應(yīng)，從而不能有效的徹底清除HBV，是HBV感染慢性化、持續(xù)化的主要原因之一。近年來研究熱點(diǎn)逐漸趨向于天然免疫，有學(xué)者認(rèn)為人體天然免疫系統(tǒng)功能受損可能是引起乙型肝炎病毒感染慢性化的重要機(jī)制。由于在人感染HBV的自然史中，早期沒有臨床癥狀，且HBV需感染5-6周后方才進(jìn)入復(fù)制指數(shù)擴(kuò)增階段，故而很難去分析人感染HBV早期機(jī)體的天然免疫狀態(tài)

6、。
　　本課題檢測(cè)乙肝丙肝患者PBMC中ZIP2和ZIP8的表達(dá)及HBV對(duì)THP-1中ZIP2、ZIP8表達(dá)的影響分化的巨噬細(xì)胞，觀察HBV對(duì)其ZIP2、ZIP8表達(dá)的影響。
　　研究目的:
　　本課題檢測(cè)乙肝丙肝患者PBMC中ZIP2和ZIP8的表達(dá);并用乙肝病毒血清將人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞(THP-1)分化的巨噬細(xì)胞進(jìn)行刺激，觀察HBV對(duì)其ZIP2、ZIP8表達(dá)的影響，以期了解HBV感染過程中ZIP2、ZIP8表達(dá)的

7、變化，為HBV持續(xù)感染的分子免疫機(jī)制提供思路及理論基礎(chǔ)。
　　實(shí)驗(yàn)方法:
　　一、臨床收集41例乙型肝炎患者、23例丙型肝炎患者以及39例正常人的抗凝外周血液樣本、原子吸收分光光度計(jì)檢測(cè)血清鋅含量、密度梯度離心法分離樣本的PBMC，通過Real-time PCR和Western-blot方法檢測(cè)PBMCs中鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體ZIP2、ZIP8的表達(dá)。
　　二、以不同乙肝病毒量血清刺激佛波酯(PMA)誘導(dǎo)的人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞(T

8、HP-1)，實(shí)時(shí)定量PCR和Western-blot檢測(cè)刺激24h和48h后巨噬細(xì)胞中ZIP2和ZIP8表達(dá)，同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞因子IL-6和TNF-α的mRNA水平的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　一、Real-time PCR和Western-blot結(jié)果顯示乙型肝炎患者和丙型肝炎患者PBMCs中ZIP2和ZIP8的表達(dá)量明顯低于正常對(duì)照組（P＜0.05）;不同病毒量的乙肝和丙肝患者之間相比，ZIP2和ZIP8的表達(dá)均沒有差異。
　　二

9、、不同乙肝病毒血清組巨噬細(xì)胞中ZIP2和ZIP8的表達(dá)在24h和48h較對(duì)照組上調(diào)，且高病毒含量組表達(dá)高于低病毒含量組。刺激48h后，高乙肝血清病毒含量組IL-6的表達(dá)相比對(duì)照組以及低乙肝病毒血清含量組上調(diào)，TNF-α的表達(dá)相比對(duì)照組以及低乙肝病毒血清含量組下調(diào)。
　　結(jié)論:
　　本研究在體內(nèi)外檢測(cè)了乙型肝炎患者和丙型肝炎患者PBMCs中ZIP2和ZIP8的表達(dá)，結(jié)果顯示患者PBMCs中ZIP2和ZIP8的表達(dá)下調(diào);用不同H