一氧化氮對(duì)桃果實(shí)脂氧合酶的調(diào)控作用.pdf

1、香氣賦予果實(shí)特征的風(fēng)味感官，構(gòu)成每種果實(shí)特有的“香氣特征譜”或“香氣指紋”，在果實(shí)風(fēng)味構(gòu)成中具有決定性作用。桃果實(shí)果實(shí)中的香氣物質(zhì)非常復(fù)雜，其中含有大量的揮發(fā)性的物質(zhì)，主要有醛類(lèi)、醇類(lèi)、酯類(lèi)、內(nèi)酯類(lèi)、萜類(lèi)和酮類(lèi)等。脂肪酸是形成一些果實(shí)香氣成分主要的前體物。脂肪酸途徑是大多數(shù)植物香氣物質(zhì)形成的主要來(lái)源，也是桃果實(shí)特征香氣物質(zhì)合成的主要途徑，通過(guò)該途徑可形成醇、醛、酯和內(nèi)酯。脂肪酸的合成途徑主要是脂氧合酶（lipoxygenase，LOX）

2、途徑。LOX途徑是將亞油酸、亞麻酸反應(yīng)生成氫過(guò)氧化物，然后和氫過(guò)氧化物裂解酶（hydroperoxidelyase，HPL）反應(yīng)生成己醛或者己烯醛，醛類(lèi)與醇脫氫酶（alcohol dehydrogenase，ADH）反應(yīng)生成相應(yīng)的醇類(lèi)，醇類(lèi)與醇?；D(zhuǎn)移酶（alcohol acyltransferases，AAT）反應(yīng)生成相應(yīng)的酯類(lèi)。
　　為了考察一氧化氮（nitric oxide, NO）對(duì)貯藏過(guò)程中肥城桃果實(shí)香氣物質(zhì)合成的影響，

3、本文研究了NO對(duì)LOX途徑中的重要酶——LOX的調(diào)控作用。以采后肥城桃為材料，用不同濃度NO溶液處理生理成熟期的桃果實(shí)，考察了常溫和冷藏過(guò)程中不同處理的桃果實(shí)中LOX活性的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，桃果實(shí)LOX活性在常溫和冷藏過(guò)程中整體均呈上升趨勢(shì)。與對(duì)照相比，15μmol L-1 NO處理比5μmol L-1 NO和30μmol L-1 NO處理的活性更低，NO處理抑制了LOX活性。
　　從美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心（National Ce

4、nter for Biotechnology Information, NCBI）獲取LOX家族基因的4個(gè)mRNA序列。通過(guò)該保守區(qū)序列設(shè)計(jì)出qPCR的兼并引物，從肥城桃的桃果實(shí)中提取出總RNA，并克隆獲得cDNA。以TUB為內(nèi)參，計(jì)算LOX-1、LOX-2、LOX-3和LOX-4拷貝數(shù)與TUB拷貝數(shù)之比。分析了LOX基因表達(dá)水平，常溫和冷藏過(guò)程中桃果內(nèi) LOX家族基因的表達(dá)量均呈下降趨勢(shì)。NO對(duì) LOX-1、LOX-2、LOX-3基因

5、表達(dá)先促進(jìn)后抑制，NO對(duì)LOX-4基因表達(dá)則是先抑制后促進(jìn)，15μmol L-1 NO處理比5μmol L-1 NO和30μmol L-1 NO處理的效果更明顯。
　　構(gòu)建了LOX-2-pET-30a、LOX-3-pET-30a重組載體，導(dǎo)入大腸桿菌Transetta(DE3)進(jìn)行蛋白表達(dá)。經(jīng)蛋白模擬分析，LOX的四種蛋白發(fā)生谷胱甘肽化反應(yīng)比發(fā)生亞硝基化反應(yīng)更容易進(jìn)行，NO與LOX-1、LOX-2、LOX-3、LOX-4蛋白的活性