細(xì)粒棘球蚴囊液對(duì)宿主肝細(xì)胞MAPK信號(hào)通路及細(xì)胞周期的影響.pdf

1、目的：探討細(xì)粒棘球蚴（Echinococcus granulosus, Eg）囊液（Hydatid cyst fluid，HCF）對(duì)宿主肝細(xì)胞MAPK信號(hào)通路（ERK通路）及增殖細(xì)胞核抗原 PCNA，細(xì)胞周期蛋白cyclin-D1，cyclin-A，cyclin-B1，cyclin-E的表達(dá)水平的影響。
　　方法：正常培養(yǎng)HpeG2細(xì)胞，囊液取自烏魯木齊屠宰場(chǎng)患有囊型包蟲病的綿羊肝臟，收集綿羊囊型包蟲病的囊液，收集后用0.22um

2、的濾器過濾，保存于-80℃。取HepG2細(xì)胞正常培養(yǎng)24小時(shí)，待細(xì)胞貼壁牢固后，換無血清培養(yǎng)液培養(yǎng)24h，將無血清培養(yǎng)后的細(xì)胞分為3組：對(duì)照組（無FCS組），實(shí)驗(yàn)組（含有囊液的無FCS培養(yǎng)液3.75％HCF組、7.5%HCF組、15%HCF組、30%HCF組、60%HCF組），正常組（含10%FCS），MTT法分別于培養(yǎng)后24h、48h、72h、96h檢測(cè)細(xì)粒棘球蚴囊液對(duì)HepG2細(xì)胞毒性及細(xì)胞的增殖作用。用流式細(xì)胞儀分別在24h、48

3、h、72h檢測(cè)細(xì)胞周期。同樣上述方法培養(yǎng)細(xì)胞后于24h、48h、72h、96h收集細(xì)胞，提取HepG2細(xì)胞蛋白保存于-80℃，Western-Blot蛋白印跡法檢測(cè) p-ERK，增殖細(xì)胞核抗原 PCNA，細(xì)胞周期蛋白cyclin-D1，cyclin-A，cyclin-B1，cyclin-E的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：MTT檢測(cè)結(jié)果顯示：在48h，72h和96h，15%，30%和60%HCF組與無FCS組相比有促進(jìn)HepG2細(xì)胞增殖的作

4、用，MTT在48h檢測(cè)結(jié)果顯示15%，30%和60%HCF組與無FCS組相比（0.317±0.057 VS0.229±0.066）、（0.532±0.041 VS0.229±0.066）、（0.600±0.043 VS0.229±0.066），在72h15%，30%和60%HCF組與無FCS組相比（0.436±0.009 VS0.236±0.034）、（0.673±0.070 VS0.236±0.034）、（0.834±0.082 VS

5、0.236±0.034），在96h15%，30%和60%HCF組與無FCS組相比（0.473±0.003 VS0.182±0.045）、（0.771±0.030 VS0.182±0.045）、（0.834±0.082 VS1.008±0.027），差異具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。流式檢測(cè)結(jié)果顯示：在24h，48h，72h，15%HCF組細(xì)胞S期比例分別為無FCS組的1.64倍，1.3倍和0.83倍，30%HCF組分別為無FCS組

6、的1.64倍，0.81倍和0.38倍。Western-Blot檢測(cè)結(jié)果顯示：15%、30%HCF組p-ERK與無FCS組相比分別在48h、24h高表達(dá)（P＜0.05），PCNA分別在48h、72h高表達(dá)（P＜0.05），cyclin-D1分別在24h高表達(dá)（P＜0.05），cyclin-A分別在48h、72h高表達(dá)（P＜0.05），cyclin-B1分別在48h、72h高表達(dá)（P＜0.05），15%HCF組cyclin-E在72h高表達(dá)