P38MAPK信號通路調(diào)控乙醛刺激的大鼠肝星狀細(xì)胞增殖、凋亡及細(xì)胞周期的研究.pdf

1、背景和目的：肝纖維化是多種慢性肝病發(fā)展演變?yōu)楦斡不谋亟?jīng)階段，是肝細(xì)胞損傷后，細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix, ECM）可逆性沉積的創(chuàng)傷愈合過程。目前認(rèn)為肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cell，HSC)的活化與增殖是肝纖維化發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，而乙醇的代謝產(chǎn)物—乙醛作為有效刺激信號在調(diào)控HSC 活化、增殖、細(xì)胞外基質(zhì)分泌等方面起重要作用，是導(dǎo)致酒精性肝纖維化發(fā)生的關(guān)鍵因素。近年來有不少的研究表明，絲裂原

2、活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase, MAPK)包括ERK、JNK、P38信號通路是HSC 活化與增殖導(dǎo)致肝纖維化發(fā)生的主要信號傳導(dǎo)通路之一。MARK家族中的細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK)通路和c-jun 氨基末端激酶（c-jun N-terminAlkinase, JNK)通路都是調(diào)控乙醛刺激HSC 增殖的重要通道，

3、但國內(nèi)外有關(guān)P38信號通路干預(yù)HSC的增殖及凋亡的研究報道還不多。本實驗旨在通過用特異性P38 絲裂原活化蛋白激酶抑制劑SB203580阻斷P38MAPK信號通路，從而探討其對乙醛刺激的大鼠肝星狀細(xì)胞增殖、凋亡、細(xì)胞周期和P38 磷酸化水平的影響。
　　 方法：體外培養(yǎng)大鼠HSC株，用SB203580（終濃度為5,10,20μmol/L）對乙醛（終濃度200μmol/L）刺激的大鼠HSC 進(jìn)行干預(yù)，分別以酶標(biāo)儀及流式細(xì)胞儀檢測H

4、SC增殖、凋亡及周期的變化，用Western Blot 法檢測磷酸化P38水平。
　　 結(jié)果：
　　 1、乙醛可以明顯促進(jìn)P38 磷酸化和HSC 增殖，而不同濃度SB203580可以明顯抑制磷酸化P38的表達(dá)，且對HSC 增殖有抑制作用，增殖抑制率分別為21.6％，27.0％，31.5％，與乙醛對照組有顯著差異(P﹤0.05)，呈劑量效應(yīng)關(guān)系；
　　 2、SB203580特異性阻斷P38MAPK信號通路對HSC

5、凋亡有促進(jìn)作用，凋亡率分別為（13.7±0.3）％,(14.9±0.2)％,(16.1±0.2)％，凋亡率逐漸增加，與乙醛對照組有顯著差異(P﹤0.05)，呈劑量效應(yīng)關(guān)系；
　　 3、SB203580特異性阻斷P38MAPK信號通路后可以明顯阻礙乙醛刺激的HSC 由G1期進(jìn)入S 期，G1/G0期細(xì)胞比例逐漸增高(29.1±1.9％，35.5±3.4％，46.0±2.6％)，S期細(xì)胞比例逐漸降低（53.4±2.6％，48.4±3.

6、6％，43.8±1.1％），與乙醛對照組有顯著差異(P﹤0.05)，呈劑量效應(yīng)關(guān)系。
　　 結(jié)論：
　　 1、大鼠HSC在乙醛刺激后，出現(xiàn)明顯增殖，G1期向S 期轉(zhuǎn)化得到促進(jìn)；
　　 2、SB203580特異性阻斷P38MAPK信號通路能抑制HSC 增殖，促進(jìn)HSC 凋亡；
　　 3、SB203580特異性阻斷P38MAPK信號通路能阻礙HSC細(xì)胞周期由G1期向S期轉(zhuǎn)化；
　　 4、SB20358