刺五加種質資源的化學及分子生物學評價研究.pdf

1、目的： 本文旨在建立刺五加種質資源的化學及分子生物學的評價方法，對來源于不同產(chǎn)地、不同性別的刺五加種質資源藥材的質量進行系統(tǒng)研究，最終找到刺五加道地藥材及其種質資源的遺傳學特性，并為對優(yōu)良種質進行強化奠定基礎。 方法： 利用高效液相色譜(HPLC)法對來源于不同產(chǎn)地刺五加種質資源藥材進行化學評價，分別測定刺五加根和莖中刺五加苷B、綠原酸、異嗪皮啶和刺五加苷D四種活性成分的含量，并研究其與生態(tài)因子關系；對不同刺五加

2、種質資源進行分子生物學評價，應用隨機擴增多態(tài)性分子標記(RAPD)方法找出不同產(chǎn)地刺五加種質資源及不同性別刺五加種質資源的遺傳學差異，并對雌性刺五加的特異分子標記進行克隆和測序，運用序列特異性擴增區(qū)域(SCAR)的方法對雌性刺五加樣品進行擴增。 結論： 本研究結合化學、生態(tài)學、分子生物學三方面對不同產(chǎn)地、不同性別刺五加種質資源藥材進行評價。將不同產(chǎn)地刺五加種質資源藥材分為化學型、生態(tài)型和基因型。 1.三個化學型包

3、括化學型Ⅰ：東方紅，五常，綏棱?；瘜W型Ⅱ：密山，亞布力?；瘜W型Ⅲ：清河，伊春?；瘜W型的特點為：刺五加苷B為四個成刺五加苷B、綠原酸、刺五加苷D、異嗪皮啶中的主成分。三個化學型(除異嗪皮啶含量在密山產(chǎn)刺五加種質藥材中略有不同外)刺五加苷B、綠原酸、刺五加苷D、異嗪皮啶含量含量順序為：化學型Ⅰ>化學型Ⅱ>化學型Ⅲ。結果顯示七個不同產(chǎn)地四個成分含量差異較大。以刺五加苷B、綠原酸、刺五加苷D、異嗪皮啶的含量為指標，伊春產(chǎn)刺五加各成分的含量明顯高

4、于其它產(chǎn)地。 2．三個生態(tài)型包括生態(tài)型Ⅰ：東方紅；生態(tài)型Ⅱ：綏棱、密山、亞布力；生態(tài)型Ⅲ：伊春、清河、五常。年積溫與刺五加中活性成分相關性最高。生態(tài)型中年積溫順序為：生態(tài)型Ⅰ>生態(tài)型Ⅱ>生態(tài)型Ⅲ。年積溫與刺五加苷B、綠原酸含量呈負相關，與異嗪皮啶和刺五加苷D含量呈正相關。年積溫為不同產(chǎn)地刺五加種質資源藥材活性成分含量的主要影響因素。 3．三個基因型包括基因型Ⅰ：密山，綏棱，亞布力，東方紅。基因型Ⅱ：包括五常?；蛐廷螅喊?/p>

5、括清河，伊春。基因型遺傳距離順序為：基因型Ⅰ<基因型Ⅱ<基因型Ⅲ。其中伊春產(chǎn)刺五加種質資源藥材遺傳多樣性最高。 4．化學型、生態(tài)型和基因型三者之間的關系如下刺五加苷B含量高的刺五加種質資源藥材與生態(tài)型Ⅲ和基因型Ⅲ的分類相吻合。刺五加苷B含量高的刺五加種質在年積溫較低、年平均溫度較低而降雨量較高的區(qū)域出現(xiàn)頻率較高；且其遺傳多樣性較高。刺五加苷B為刺五加活性成分中的主成分，故可推斷環(huán)境因素為年積溫較低、年平均溫度較低而降雨量較高是優(yōu)

6、質刺五加種質資源藥材的適宜環(huán)境參數(shù)。綠原酸含量高的刺五加種質資源與生態(tài)型Ⅱ和基因型Ⅱ的分類相吻合，此種類型刺五加種質資源具有高綠原酸含量，中等遺傳多樣性，各環(huán)境因素都較溫和的地區(qū)為綠原酸含量高的刺五加種質資源藥材的適宜產(chǎn)區(qū)；刺五加苷D、異嗪皮啶的含量和環(huán)境因素分布趨勢尚不明確，有待于進一步分研究。 5．本研究對雌性及雄性刺五加種質資源進行研究，首次獲得了雌性刺五加種質資源所特異片段。進行BlastX分析證明該雌性刺五加種質資源所