沖擊波和缺氧對(duì)豚鼠內(nèi)耳的聯(lián)合致傷效應(yīng)研究.pdf

1、目的： 沖擊傷(blastinjury,BI)是軍事醫(yī)學(xué)、創(chuàng)傷醫(yī)學(xué)和災(zāi)害醫(yī)學(xué)研究的重要課題之一。隨著新型爆炸性武器(如燃料空氣炸彈等)和多功能武器在戰(zhàn)場(chǎng)上開(kāi)始投入使用、密閉和相對(duì)密閉的空間環(huán)境以及高原條件下爆炸的發(fā)生，使聽(tīng)覺(jué)系統(tǒng)遭受的損傷除單純沖擊傷外，沖擊波缺氧聯(lián)合損傷也大大增加。已有研究證實(shí)環(huán)境大氣壓減低引起生物對(duì)沖擊波耐受性降低，推測(cè)可能與空氣中氧分壓低，缺氧使毛細(xì)血管脆性和通透性增加，經(jīng)受沖擊波暴露時(shí)，毛細(xì)血管易破裂出血

2、，通透性增加使液體滲出增多有關(guān)，由此使肺出血和肺水腫更重，死亡率更高。內(nèi)耳是沖擊波和缺氧重要的靶器官。因此，內(nèi)耳沖擊波缺氧聯(lián)合損傷的研究正變得越來(lái)越重要。本研究利用Ⅰ型生物激波管(biologyshocktube，BST)和低氧艙建立豚鼠內(nèi)耳沖擊波缺氧聯(lián)合損傷動(dòng)物模型，并觀察豚鼠內(nèi)耳沖擊波缺氧聯(lián)合損傷后早期傷情特點(diǎn)及耳蝸糖皮質(zhì)激素受體(GR)、熱休克蛋白90(HSP90)表達(dá)的變化規(guī)律，為內(nèi)耳沖擊波缺氧聯(lián)合損傷的預(yù)防、診斷和治療以及沖擊

3、波缺氧聯(lián)合損傷傷情分級(jí)提供進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1.豚鼠內(nèi)耳沖擊波缺氧聯(lián)合損傷動(dòng)物模型的建立：成年雜色豚鼠64只，隨機(jī)分為4組：正常對(duì)照組、單純?nèi)毖踅M、沖擊傷組及沖擊波缺氧聯(lián)合損傷組。正常對(duì)照組動(dòng)物不作任何處理；單純?nèi)毖踅M動(dòng)物低氧艙內(nèi)吸入10％低氧混合氣體1小時(shí)，混合氣體組成為：88％氮?dú)狻?％二氧化碳和10％氧氣；沖擊傷組利用BST-Ⅰ型生物激波管致沖擊傷，沖擊波超壓峰值為50kPa，致傷1次；沖擊波缺氧聯(lián)合損傷

4、組在沖擊波致沖擊傷后，立即置于低氧觀察艙內(nèi)，吸入10％低氧混合氣體1小時(shí)。觀察豚鼠活動(dòng)狀況、呼吸頻率等一般情況。 2.豚鼠內(nèi)耳沖擊波缺氧聯(lián)合損傷早期傷情特點(diǎn)研究：成年雜色豚鼠64只，隨機(jī)分為4組：正常對(duì)照組、單純?nèi)毖踅M、沖擊傷組及沖擊波缺氧聯(lián)合損傷組。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別于致傷前和致傷后6小時(shí)檢測(cè)聽(tīng)性腦干反應(yīng)聽(tīng)閾。使用統(tǒng)計(jì)軟件分別計(jì)算致傷前后和除正常組外其他3組致傷后組間的差異。分別于致傷前和致傷后6小時(shí)觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的一般情況。致傷豚鼠

5、觀察結(jié)束后，每組隨機(jī)分為A、B兩個(gè)小組：A組8只豚鼠用碘化丙錠(PI)染色，LeicaDFC-480熒光顯微鏡進(jìn)行觀察、毛細(xì)胞記數(shù)，計(jì)算毛細(xì)胞缺失率；B組8只豚鼠常規(guī)HE染色耳蝸組織病理觀察。 3.內(nèi)耳糖皮質(zhì)激素受體和熱休克蛋白90的檢測(cè)：成年雜色豚鼠64只，隨機(jī)分為4組：①正常對(duì)照組：不作任何處理。②單純?nèi)毖踅M：低氧觀察艙內(nèi)吸入10％低氧混合氣體。③沖擊傷組：采用BST-1型生物激波管內(nèi)超壓峰值50kPa持續(xù)10毫秒。④沖擊波

6、缺氧聯(lián)合損傷組：和沖擊傷相同條件致傷后，低氧觀察艙內(nèi)吸入10％低氧混合氣體。所有動(dòng)物于傷后6小時(shí)處死，利用免疫組化技術(shù)檢測(cè)糖皮質(zhì)激素受體和熱休克蛋白90在耳蝸中的表達(dá)。 結(jié)果： 1.豚鼠內(nèi)耳沖擊波缺氧聯(lián)合損傷模型：沖擊波缺氧聯(lián)合損傷后，豚鼠精神極度萎靡，呼吸急促，耳廓反射遲鈍，傷后早期豚鼠聽(tīng)閾顯著升高(P＜0.01)。單純沖擊傷后動(dòng)物一般反應(yīng)與沖擊波缺氧聯(lián)合損傷組相似，但程度稍輕；聽(tīng)閾升高程度與沖擊波缺氧聯(lián)合損傷組相比較

7、也存在非常顯著差異(P＜0.01)。使用BST-Ⅰ型生物激波管給實(shí)驗(yàn)豚鼠致傷后，移入低氧艙內(nèi)持續(xù)吸入10％低氧混合氣體，可穩(wěn)定地復(fù)制出適合本試驗(yàn)研究的內(nèi)耳沖擊波缺氧聯(lián)合損傷動(dòng)物模型。 2.豚鼠內(nèi)耳沖擊波缺氧聯(lián)合損傷早期傷情特點(diǎn)：沖擊波缺氧聯(lián)合損傷后，豚鼠精神極度萎靡，呼吸急促，反應(yīng)遲鈍；3小時(shí)后，豚鼠呼吸平穩(wěn)，對(duì)外界刺激反應(yīng)輕微，部分豚鼠仍可見(jiàn)紫紺；6小時(shí)后，豚鼠呼吸恢復(fù)正常，口唇紫紺消失，但活動(dòng)少，反映仍顯遲鈍。沖擊波致傷后所

8、有動(dòng)物鼓膜均有不同程度穿孔和聽(tīng)骨鏈斷裂或脫位。傷后6小時(shí)聽(tīng)性腦干反應(yīng)聽(tīng)閾檢測(cè)發(fā)現(xiàn)聽(tīng)性腦干反應(yīng)閾值顯著升高，與其它三組相比均有顯著差異(P＜0.01)。耳蝸基底膜(第二轉(zhuǎn))碘化丙錠染色，觀察發(fā)現(xiàn)耳蝸外毛細(xì)胞排列欠整齊，可見(jiàn)不同程度散在性、節(jié)段性、大片缺失，耳蝸外毛細(xì)胞缺失率與其它三組相比均具有非常顯著差異(P＜0.01)。通過(guò)免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)，聯(lián)合損傷后早期豚鼠耳蝸組織糖皮激素受體表達(dá)顯著下降，熱休克蛋白90表達(dá)顯著升高(P＜0.01