食用油DNA提取方法及轉(zhuǎn)基因成分檢測技術(shù)的研究.pdf

1、從古至今，植物源性食用油一直是人類得以健康生活的保證。近年來，許多農(nóng)業(yè)公司利用包括轉(zhuǎn)基因技術(shù)在內(nèi)的現(xiàn)代生物技術(shù)開發(fā)新的植物品系。由于轉(zhuǎn)基因植物存在的安全性問題使得轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物的標簽問題成為公眾關(guān)注的主要熱點，已有30多個國家制定了相應(yīng)的法律法規(guī)對轉(zhuǎn)基因作物及其衍生產(chǎn)品進行標簽。目前，許多未經(jīng)標簽和認證的轉(zhuǎn)基因生物及其深加工產(chǎn)品可能已經(jīng)進入中國市場，這就迫切地需要合適的檢測手段以確定這些食品中是否含有轉(zhuǎn)基因成分。 以油脂為材料提取

2、 DNA 進行分子生物學(xué)研究的關(guān)鍵是能否提取到高質(zhì)量的油脂DNA。自DNA分析技術(shù)興起后，國內(nèi)外在這方面做出了巨大的成就，發(fā)展了多種轉(zhuǎn)基因食品DNA檢測方法。但仍存在以下問題：①各種提取方法通用性不好。在許多實驗中存在擴增成功率在物種和食品種類之間的差異。雖然專用DNA提取試劑盒有較好的通用性，但昂貴的價格限制了該試劑盒的廣泛應(yīng)用，因此構(gòu)建一套效果好、通用性好、性價比高的油脂DNA提取方法，可以大大推進油脂DNA技術(shù)的推廣。②對外源基因

3、最佳PCR檢測方法的摸索，檢驗靈敏度和效率都不高。 本文以4種植物油為材料，分別構(gòu)建了2種新的DNA提取方法解決現(xiàn)存的問題；分別用普通PCR和降落PCR檢測轉(zhuǎn)基因成分，并對其反應(yīng)體系和條件進行優(yōu)化，主要結(jié)果如下： 1、本論文中構(gòu)建的改進型CTAB提取方法廣泛適用于各種植物油DNA提取，僅一次提取即得到高質(zhì)量的模板DNA，成功率高，一般不需重復(fù)提取，對PCR產(chǎn)物的擴增結(jié)果也證實了方法的可靠性和通用性。雖然有些公司的油脂DN

4、A提取專用試劑盒也有著較好的通用性，但其昂貴的價格(25元/次)使其在大量分析樣品時受到很大的限制。與之相比，本方法成本低廉，每提取一個樣品的成本低于 3 元，用實驗室常用試劑即可完成油脂DNA提取，同時產(chǎn)物純度高于專用試劑盒。即擁有超過專業(yè)試劑盒的提取效果，又盡可能的降低了實驗成本，真正實現(xiàn)了實驗室通用性，有利于油脂DNA技術(shù)的迅速推廣。 2、本研究中還利用快速蛋白液相色譜法(Fast protein liquid chrom

5、atographyFPLC)，通過陰離子交換柱分離純化DNA，提高了產(chǎn)物的純度，關(guān)鍵是可以把完整基因組DNA與DNA片斷分開，同時節(jié)省了提取時間，回收率高，適宜少量樣品的快速DNA提取。 3、通過優(yōu)化實驗對普通PCR法檢測外源基因進行分析，得出以下最佳反應(yīng)條件：①Mg<,2+> 濃度為 2.5mmol/L、引物濃度為 0.1μmol/L．至0.4μmol/L、dNTPs 濃度200μmol/L，Taq酶添加量為5U。最佳退火溫度