甘草酸二銨對潰瘍性結腸炎大鼠作用的實驗研究.pdf

1、研究背景:潰瘍性結腸炎(ulcerative colitis，UC)是一種病因尚不十分清楚的主要累及直腸、結腸黏膜的慢性非特異性炎癥和潰瘍性病變，其發(fā)病率不論在國內和國外都有逐年增高的趨勢。雖然近年來UC在環(huán)境、感染、遺傳、免疫等病因學方面以及藥物治療方面的研究取得了一定的進展，并且一些新型藥物也已用于結腸炎的基礎研究和臨床治療，如新型5-ASA制劑、免疫反應調控劑(抗CD3抗體visilizumab)及細胞因子調控劑(抗TNF—α的單

2、克隆抗體infliximab)等，但由于不良反應發(fā)生率比較高、價格昂貴等問題影響了這些藥物在臨床上的廣泛應用，因此，尋找一種療效確切、安全、價格便宜的藥物用于治療UC具有十分重要的臨床意義。 甘草酸二銨(Diammonium Glycyrrhizinate，DG)是甘草有效成分的第三代提取物，具有保護膜結構、抗生物氧化、調節(jié)免疫及影響內源性類固醇激素等生物活性。由于DG具有較強的與皮質類固醇類似的非特異性抗炎作用，因此可能成為

3、替代皮質激素治療UC的一種有效藥物，尤其是對那些對激素抵抗、依賴和有激素應用禁忌癥的患者。到目前為止，國內外對DG用于治療肝炎的研究報道較多，而有關其治療UC的報道卻很少，且機制不明。本課題主要研究DG治療UC模型大鼠的療效并探討相關的作用機制，進而為臨床應用其治療UC提供一定的理論依據。 目的:觀察甘草酸二銨對潰瘍性結腸炎大鼠的治療作用并探討其可能的作用機制。 方法:采用2,4—二硝基氯苯和乙酸聯(lián)合建模法制備UC模型

4、，模型形成后將存活大鼠隨機分為模型對照組和4個治療組，另設正常對照組，每組10只。各治療組給藥方法：5-ASA組給予5-ASA溶液(100mg/kg)灌腸；DG組給予DG溶液(40mg/kg)灌腸；5-ASA+DG組給予5-ASA溶液(100mg/kg)(上午8時)和DG溶液(40mg/kg)(下午4時)灌腸；5-ASA+地塞米松組給予5-ASA溶液(100 mg/kg)(上午8時)和地塞米松溶液(0.2mg/kg)(下午4時)灌腸，每

5、日1次，共7日。每日觀察各組大鼠大便性狀、便血及體重改變情況，評價疾病活動指數(shù)(DAI)。治療7天后，各組大鼠腹主動脈采血，分離血清，-20℃貯存，采用放射免疫法檢測血清白細胞介素-4(IL-4)、白細胞介素-6(IL-6)水平。取距肛門約8cm處結腸組織，一部分經10％甲醛溶液固定，進行HE染色；另一部分制作腸組織勻漿，采用化學比色法檢測髓過氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)活性。此外，采用免疫組織化學法分析結腸黏膜核因子—

6、κB(NF—κB)、誘生型一氧化氮合酶(iNOS)的表達。 結果:1．與正常對照組比較，模型對照組DAI、組織學評分及MPO活性顯著增高(P＜0.05)，血清IL-4、結腸黏膜SOD活性顯著降低(P＜0.05)，血清IL-6、結腸黏膜NF—κB p65、iNOS的表達顯著增加(P＜0.05)。2．治療7天后，與模型對照組相比，5-ASA組和DG組的DAI、組織學評分及MPO活性顯著降低(P＜0.05)，血清IL-4、結腸黏膜S

7、OD活性顯著增加(P＜0.05)，血清IL-6、結腸黏膜NF—κB p65、iNOS的表達顯著降低(P＜0.05)，但與正常對照組相比各指標差異有統(tǒng)計學意義。3．與5-ASA組和/或DG組相比，5-ASA+DG組和5-ASA+地塞米松組的DAI、組織學損傷評分及MPO活性均顯著降低(P＜0.05)，血清IL-4、結腸黏膜SOD活性均顯著增加(P＜0.05)，血清IL-6、結腸黏膜NF—κB p65、iNOS的表達均顯著降低(P＜0.05

8、)，且與正常對照組相比各指標差異無統(tǒng)計學意義。4．DG組與5-ASA組相比，上述各指標差異無統(tǒng)計學意義；5-ASA+DG組與5-ASA+地塞米松組相比，上述各指標差異無統(tǒng)計學意義。 結論: DG以及5-ASA均可以作為治療大鼠UC的藥物，其機制可能是通過調節(jié)NF—κBp65、iNOS在結腸黏膜的表達，增加IL-4釋放及結腸黏膜SOD活性，抑制IL-6產生，而達到治療結腸炎的目的，兩者療效相當，聯(lián)合應用時效果更佳，且具有與地塞米