蘋果屬種質(zhì)資源抗寒性鑒定及抗寒基因FAD2和GPAT的克隆和表達(dá)分析.pdf

1、EvaluationoncoldhardinessofMalusgermplasmandcoldhardinessgenesFAD2andGPATcloningandexpressionanalysis。上。heSlSsubmittedtoQingdaoAgt／cultumlUniversityInFulfillmentoftheRequirememfOrtheDegreeof—MasterofAgronomyLiuXiuli(Depa

2、rtmentofHorticulture)Supervisor：ZhuJunQingdaoChinaJune，2013青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要捅要本試驗(yàn)p744種蘋果砧木的一年生休眠枝條為試材，進(jìn)行0℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃人工低溫冷凍處理，應(yīng)用電導(dǎo)率法測定供試枝條在不同低溫下細(xì)胞膜透性的變化，采用方程擬合求得半致死溫度，對44種蘋果砧木抗寒性的強(qiáng)弱進(jìn)行比較。分別以山定子和嘎拉為試材，克隆得到油酸去飽和酶基因^碭尉

3、D2和甘油3磷酸?；D(zhuǎn)移酶基因MdGPAT，并對這兩個(gè)基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析和表達(dá)分析。試驗(yàn)研究結(jié)果如下：1供試44種蘋果砧木隨著溫度的降低砧木枝條的相對電導(dǎo)率逐漸升高，通過方程擬合求出半致死溫度，半致死溫度最低的為山定子，最高的為滄江海棠，分別為457624。C、265283℃。將所測砧木抗寒性分為5個(gè)等級，分別為抗寒性強(qiáng)、抗寒性較強(qiáng)、抗寒性中、抗寒性較弱、抗寒性弱。2采用RTPcR技術(shù)，首次從山定子中克隆到油酸去飽和酸酶基因，該基因

4、命名為MbFAD2。其最大開放閱讀框?yàn)?149bp，編碼個(gè)382個(gè)氨基酸，在GenBank的登陸號為KC702671。在NCBI上經(jīng)過BLASTp比對分析發(fā)現(xiàn)該基因?qū)儆谖抉?，池家族。?jīng)過DNAMAN60軟件分析的出該基因有三個(gè)高度保守的組氨酸簇，分別為HECGHH(HisI區(qū))、HRRHH(HisII區(qū))和HVAHH(HisⅢ區(qū))。二級結(jié)構(gòu)分析表明，MbFAD2蛋白分子中，Q螺旋、隨機(jī)卷曲和不規(guī)則卷曲分別為3586％、1623％、479

5、1％，系統(tǒng)進(jìn)化樹關(guān)系分析表明，MbFAD2與橡膠樹和毛白楊的親緣關(guān)系最近，共同形成一個(gè)分支，親源關(guān)系最遠(yuǎn)的為玉米和中間錦雞兒。MbFAD2進(jìn)行蛋白跨膜區(qū)分析發(fā)現(xiàn)該蛋白具有六個(gè)跨膜區(qū)域。3采用RTPCR技術(shù)，首次從嘎拉葉片的cDNA中克隆得到甘油三磷酸?；D(zhuǎn)移酶基因，該基因命名為MdGPAT。其最大開放閱讀框?yàn)?365bp，編碼個(gè)454個(gè)氨基酸，在GenBan墩aO登陸號為KC693008。在NcBI上經(jīng)過BLASTp比對分析發(fā)現(xiàn)該基因?qū)?/p>

6、于上尸幽r基因超級家族。經(jīng)過DNAMAN6O軟件分析的該基因的氨基酸序列具有wiapsggrdrp的保守區(qū)域。二級結(jié)構(gòu)分析表明，MdGPA騷白分子中，擴(kuò)展鏈、c【螺旋結(jié)構(gòu)和無規(guī)則卷曲分別占5044％、3943％、1013％。系統(tǒng)進(jìn)化樹關(guān)系分析表明，M，硎鴨南瓜的親緣關(guān)系最近，共同形成一個(gè)分支，親源關(guān)系最遠(yuǎn)的為番茄和玉米。MdGPA隧行蛋白跨膜區(qū)分析發(fā)現(xiàn)該蛋白不具有跨膜區(qū)域。4通過實(shí)時(shí)熒光定量表達(dá)研究表明，MbFAD2在山定子中的根、莖、