藍(lán)莓主要真菌病害的分離鑒定與防治研究.pdf

1、藍(lán)莓（Vaccinium spp.），杜鵑花科越橘屬多年生灌木果樹，又可稱為越橘，果實(shí)內(nèi)含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，具有強(qiáng)心、抗癌等功能，被列為五大健康水果之一。隨著藍(lán)莓市場的迅猛發(fā)展，藍(lán)莓種植面積不斷擴(kuò)增，但是藍(lán)莓病害的發(fā)生卻逐步成為阻礙藍(lán)莓產(chǎn)業(yè)發(fā)展的主要因素之一。雖然國內(nèi)外對藍(lán)莓病害均有研究，但是缺乏對病原尤其是真菌病原的系統(tǒng)分類研究。本研究將明確浙江南高叢藍(lán)莓主要真菌病害的病原種類及防治方法，為病害的防治提供理論和技術(shù)支持。
　　本

2、研究包括4個(gè)方面的研究內(nèi)容:首先進(jìn)行藍(lán)莓葉片、果實(shí)及枝干等主要真菌病害的采集，運(yùn)用組織分離法和單孢純化法進(jìn)行病原菌分離純化，采用柯赫氏法則驗(yàn)證病原真菌的致病性，進(jìn)而采用常規(guī)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)相結(jié)合的方法進(jìn)行病原菌鑒定，明確病原菌的分類地位;其次對分離的病原菌進(jìn)行生物學(xué)特性研究，設(shè)置單一變量，采用菌絲生長速率法，測定不同溫度、pH值、光照、培養(yǎng)基處理下菌絲生長量的變化，及病原菌的致死溫度的測定;然后對分離的病原菌進(jìn)行化學(xué)防治研究，采用菌絲

3、生長抑制法，測定各藥劑對病原菌的抑制率，計(jì)算毒力回歸方程及有效抑制中濃度;最后，通過平板抑制法尋找病原菌的拮抗菌株，進(jìn)行初步生物防治研究。
　　本研究的主要結(jié)果包括:
　　1、分離并鑒定出6種藍(lán)莓主要病原真菌:灰霉病病原菌灰葡萄孢菌X1-1（Botrytis cinerea），莖潰瘍病病原菌擬莖點(diǎn)霉菌JA4（Phomopsis sp.）、葡萄座腔菌JB2（Botryosphaeria dothidea），枝枯病病原菌棒狀擬盤

4、多毛孢菌ZA1（Pestalotiopsis clavispora），葉斑病病原菌擬盤多毛孢菌YB-1(Pestalotiopsisp.)、炭疽菌YB-2(Colletotrichum gloeosporioides)。
　　2、灰霉病病原菌X1-1的最適生長溫度為20℃，最適pH值6，在PDA及BPY培養(yǎng)基中菌絲生長最快，PDA培養(yǎng)基中產(chǎn)孢最快，致死溫度40℃，10 min。莖潰瘍病病原菌JA4菌絲最適生長溫度25℃，在pH4～

5、8的PDA培養(yǎng)基上生長迅速，在MEA+藍(lán)莓莖段培養(yǎng)基中產(chǎn)孢最快，致死溫度45℃，10 min; JB2最適生長溫度25～30℃，弱酸條件下菌絲生長速率最快，光照有利于菌絲的生長，在MEA+藍(lán)莓莖段的培養(yǎng)基中，菌絲生長迅速且產(chǎn)孢快，量多，致死溫度55℃，10min。枝枯病病原菌ZA1最適生長溫度25℃，最適pH值4，對營養(yǎng)物的要求較低，PDA培養(yǎng)基上生長最好，致死溫度55℃，10 min。葉斑病病原菌YB-1在25～30℃范圍內(nèi)，pH4～

6、7，有光照條件下最適合生長，對培養(yǎng)基的適用范圍較廣;YB-2在25℃，pH5，光照情況下生長良好，PDA、PMA、PSA、LB、BPY、MEA培養(yǎng)基上生長較好;YB-1及YB-2的致死溫度為45℃，10 min。
　　3、通過甲基硫菌靈、代森錳鋅、苯醚甲環(huán)唑、嘧菌酯、異菌脲、嘧霉胺或葉枯唑6種殺菌劑對6種病原菌的菌絲生長抑制率測定發(fā)現(xiàn)，甲基硫菌靈及異菌脲對X1-1抑制效果最好;甲基硫菌靈、苯醚甲環(huán)唑、異菌脲對JA4、JB2、YB-

7、1、YB-2菌絲抑制效果較好;苯醚甲環(huán)唑?qū)A1的抑制效果最好;嘧菌酯對6種病原菌的抑制效果最差。
　　4、從藍(lán)莓健康葉片中通過初步篩選分離得到拮抗細(xì)菌BL-01，采用16SrDNA通用引物(27F/1492R)擴(kuò)增序列，分析發(fā)現(xiàn)BL-01屬于芽孢桿菌屬（Bacillus）;采用16S rDNA特異引物、rpoB基因的引物、gyrA基因的引物擴(kuò)增序列，分析確定拮抗細(xì)菌BL-01為短小芽孢桿菌（Bacillus pumilus）。生