抗戾飲對(duì)甲1型流感病毒FM1株致小鼠肺炎的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、嚴(yán)重急性呼吸綜合征(SARS)是由新型冠狀病毒引起的一種發(fā)病急、傳播快、病死率高的呼吸道傳染病，曾在世界上32個(gè)國(guó)家和地區(qū)流行，給人類造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，雖然目前已成功地控制了SARS，但仍然面臨病毒是否變異及再次侵襲人類的挑戰(zhàn)。 流行性感冒(流感)是發(fā)病率很高、有一定病死率的家喻戶曉的疾病，但人們包括醫(yī)療工作者對(duì)其重視不夠。20世紀(jì)以來全球已有4次流感大流行奪去幾千萬人的生命，死亡人數(shù)超過第一、二次世界大戰(zhàn)死亡人數(shù)的總和。

2、 禽流行性感冒(禽流感)在禽類中流行已有超過100年的歷史，可累及各種家禽與野生禽類，也累及少數(shù)哺乳動(dòng)物。但直到1997年5月才在我國(guó)香港發(fā)現(xiàn)首例人類直接感染禽流感病毒。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)能使人類致病的禽流感病毒有H5N1、H9N2、H7N7、H7N3等血清型，它們都屬于甲型流感病毒，感染H5N1者有50％左右發(fā)生肺炎，病死率30％左右，超過SARS，今年我國(guó)已發(fā)現(xiàn)數(shù)例因禽流感致人死亡的個(gè)案。值得慶幸的是，目前尚沒有人類間傳播禽流感的證據(jù)

3、，致病性強(qiáng)的病毒如H5N1型一旦獲得人傳人的能力，其結(jié)果的嚴(yán)重性可能不遜于SARS帶來的威脅。 SARS冠狀病毒、禽流感病毒和流感病毒都是通過呼吸道侵入人體引起呼吸道和(或)全身感染的病毒。面對(duì)呼吸道病毒感染逐漸增多、傳染性逐漸增強(qiáng)、病情逐漸加重的趨勢(shì)，如何尋找有效的預(yù)防和治療對(duì)策，減輕呼吸道病毒感染造成的損害，是中西醫(yī)學(xué)者共同面臨的挑戰(zhàn)。 一、文獻(xiàn)研究SARS是由變異的冠狀病毒(SARS-CoV)感染所致。冠狀病毒(C

4、oV)是一類有囊膜的單股正鏈RNA病毒，在分類上屬于冠狀病毒科，冠狀病毒屬。在SARS的發(fā)病過程中，SARS-CoV病毒本身不是決定性的因素，SARS-CoV侵入人體導(dǎo)致免疫功能失調(diào)才是發(fā)病的主要因素。SARS-CoV的靶器官主要是肺臟和免疫系統(tǒng)。一方面既可以引起機(jī)體的免疫反應(yīng)對(duì)抗SARS-CoV，另一方面也可以造成宿主免疫抑制或免疫損傷，主要與以下環(huán)節(jié)有關(guān)。(1)人體非特異性免疫細(xì)胞反應(yīng)；(2)T細(xì)胞免疫失衡；(3)免疫反應(yīng)過強(qiáng)和自身

5、免疫反應(yīng)；(4)細(xì)胞因子如TNF-α、IL-2、IL-6的參與和細(xì)胞調(diào)亡。 流行性感冒病毒(influenzavirus)簡(jiǎn)稱流感病毒，屬于正粘病毒科，為分節(jié)段的單負(fù)股RNA病毒。根據(jù)核蛋白和基質(zhì)蛋白抗原性及基因特征的差異，流感病毒可分為甲型(A)、乙型(B)、丙型(C)三種。同型流感病毒又根據(jù)血凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)抗原性不同分為若干亞型，甲型流感病毒的HA抗原有15個(gè)亞型(H1～H15)，其中H1～H3與人流感病毒

6、相關(guān)；NA抗原有9個(gè)亞型(N1～N9)，其中僅N1和N2是人流感病毒所特有。感染禽類的甲型流感病毒即稱為禽流感病毒(AIV)，由H5和H7亞型毒株(以H5N1和H7N7為代表)所引起的禽類疾病稱為高致病性禽流感。通過對(duì)流感病毒感染機(jī)制的研究發(fā)現(xiàn)，呼吸道抗原呈遞細(xì)胞和CD4+、CD8+T細(xì)胞及相關(guān)的細(xì)胞因子的產(chǎn)生在病變發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵作用，病毒感染后可刺激單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、白細(xì)胞等分泌3種細(xì)胞因子：趨化因子(如IP-10)、炎性因子(

7、如HIL-6、IL-18)、TNF-α，進(jìn)一步誘導(dǎo)免疫細(xì)胞聚集，而導(dǎo)致細(xì)胞因子調(diào)節(jié)失控。高致病性AIV突破種屬屏障，經(jīng)呼吸道感染人體后，可在機(jī)體內(nèi)復(fù)制、擴(kuò)散，不僅可以直接損傷組織、細(xì)胞，而且可以誘導(dǎo)機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生病理性免疫反應(yīng)、間接地導(dǎo)致機(jī)體組織、細(xì)胞產(chǎn)生病理?yè)p傷。因此，三種呼吸道病毒的一個(gè)共同致病機(jī)理是導(dǎo)致機(jī)體免疫功能的失衡。 中醫(yī)將SARS歸于“溫病”的范疇。病因主要為感受“疫毒時(shí)邪”，病機(jī)與“濕、熱、毒、瘀、虛”等有關(guān)。

8、導(dǎo)師彭勝權(quán)教授認(rèn)為，該病可診斷為“風(fēng)溫”，病因?yàn)轱L(fēng)熱夾濕之疫病病邪，病機(jī)主要為病邪閉阻肺絡(luò)，肺氣失于宣發(fā)與肅降，傳變是由表及里?？偟闹委熢瓌t是謹(jǐn)守病機(jī)，或祛風(fēng)于熱外，或滲濕于熱下。臨床擬抗戾飲方為主加減治療SARS，取得較好的療效，臨床觀察38例，病人退熱時(shí)間為5天，平均住院18天，明顯優(yōu)于單純西醫(yī)治療。流感的病因?yàn)楦惺軙r(shí)行戾氣所致，病機(jī)為感受時(shí)邪，營(yíng)衛(wèi)失和，邪毒入里，肺熱壅盛，可有衛(wèi)、氣、營(yíng)、血傳變規(guī)律。治療當(dāng)辨清表里內(nèi)外，邪未入里者

9、，當(dāng)以清解透表為法；邪氣內(nèi)陷入里者，法以清熱解毒、透邪外出。 二、實(shí)驗(yàn)研究1、實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ图胺椒ū緦?shí)驗(yàn)以流感病毒滴鼻造成小鼠病毒性肺炎為模型，采用抗戾飲煎劑進(jìn)行小鼠體內(nèi)外試驗(yàn)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)所選指標(biāo)分別為肺指數(shù)、死亡保護(hù)率、延長(zhǎng)生命率、IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α、T細(xì)胞亞群、吞噬指數(shù)α等。將小白鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性藥物對(duì)照組(病毒唑組)、抗戾飲大、小劑量組，每組10只。在乙醚輕度麻醉下，用流感病毒液滴鼻感

10、染，在病毒攻擊前一天開始給藥。共給藥4天，然后進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)。 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)抗戾飲對(duì)甲1型流感病毒FM1株致小鼠肺炎的作用結(jié)果顯示，抗戾飲能降低甲1型流感病毒FM1株致小鼠肺炎的肺指數(shù)值，對(duì)甲1型流感病毒FM1株致小鼠肺炎具有較好的保護(hù)作用，且能明顯減輕甲1型流感病毒FM1株致小鼠肺炎的肺組織病變程度。但抗戾飲無毒濃度在體外對(duì)甲1型流感病毒FM1株無抑制作用。 (2)抗戾飲對(duì)甲1型流感病毒FM1株致小鼠肺炎IL

11、-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α的影響 結(jié)果顯示，流感病毒肺炎小鼠的血漿IL-2及IFN-γ水平降低，而IL-6、TNF-α水平明顯升高，提示病毒感染后引起了機(jī)體免疫功能的失調(diào)。經(jīng)抗戾飲治療后，血漿中IL-2、IFN-γ水平均明顯升高，說明該藥可促進(jìn)病毒感染小鼠IL-2及IFN-γ的產(chǎn)生。這兩種細(xì)胞因子均能增強(qiáng)細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)作用，并激活自然殺傷細(xì)胞(NK)，而機(jī)體內(nèi)NK細(xì)胞、IFN-γ和IL-2相互作用，可形成免

12、疫網(wǎng)絡(luò)，增強(qiáng)抗病毒和免疫調(diào)節(jié)作用。結(jié)果還顯示，經(jīng)抗戾飲治療后，血漿中IL-6、TNF-α水平明顯降低，這對(duì)于減輕機(jī)體免疫病理?yè)p害具有重要意義。因?yàn)镮L-6、TNF-α是致炎因子，它們是構(gòu)成免疫性病理?yè)p害的重要因素，阻斷TNF-α等的過量產(chǎn)生，可以減輕或清除其對(duì)器官的有害作用。據(jù)報(bào)道在腺病毒感染小鼠模型中，早期浸潤(rùn)階段的鼠肺及血漿中均檢測(cè)到較高效價(jià)的TNF-α、IL-1、IL-6，提示這些細(xì)胞因子在炎癥產(chǎn)生過程中具有重要作用。 (

13、3)抗戾飲對(duì)甲1型流感病毒FM1株致小鼠肺炎T淋巴細(xì)胞亞群的影響結(jié)果顯示，流感病毒感染小鼠后，CD3+、CD4+、CD4+/CD8+明顯降低，CD8+顯著升高，均為T細(xì)胞免疫抑制的表現(xiàn)，可認(rèn)為是流感病毒感染所致暫時(shí)性細(xì)胞免疫缺陷，提示細(xì)胞免疫參與了流感病毒的感染過程。經(jīng)抗戾飲治療后，CD3+、CD4+、CD4+/CD8+升高，CD8+降低，說明抗戾飲具有調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫的功能，可能在流感病毒感染中起主要保護(hù)作用，從而阻止疾病的發(fā)展，促進(jìn)病變

14、的恢復(fù)。且結(jié)果還顯示抗戾飲能增強(qiáng)小鼠單核吞噬細(xì)胞的吞噬功能。 本實(shí)驗(yàn)提示，抗戾飲在體外對(duì)流感病毒無抑制作用，但體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果表明抗戾飲對(duì)甲1型流感病毒FM1株致小鼠肺炎具有良好的治療效果。說明抗戾飲不是直接通過抑制或殺滅流感病毒來起作用，而是主要通過改善或調(diào)整流感病毒肺炎小鼠的免疫功能，達(dá)到減輕流感病毒肺炎的病變程度，從而降低小鼠死亡率。因呼吸道病毒的致病機(jī)理有一共同點(diǎn)即引起機(jī)體免疫反應(yīng)失調(diào)，據(jù)此可推測(cè)，抗戾飲治療SARS的機(jī)理可