花生PYM離體誘變及耐鹽抗旱突變體的篩選研究.pdf

1、J’Y●‘一Studies0nInvitroMutagenesisUsingPYMandDirectedScreeningforSaltandHYPtolerantMutantsinPeanutsThesissubmittedtoInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofScienceSunHaiyan(CollegeofLifeSciences)Supervisor：Prof

2、WangJingshanQingdao。ChinaJune，2013青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要摘要花生是重要的油料作物和經(jīng)濟(jì)作物，培育高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)抗逆性花生新品種對(duì)提高花生產(chǎn)值有著重要意義。但當(dāng)前花生栽培種的遺傳基礎(chǔ)狹窄問題愈來愈突出，已經(jīng)在很大程度上限制了花生育種獲得突破性進(jìn)展。本研究在前期研究確立的花生體胚誘導(dǎo)及高頻率植株再生體系和確立的適宜平陽(yáng)霉素(PYM)誘變濃度基礎(chǔ)上，以PYM作為誘變劑進(jìn)行了花生離體誘變及定向篩選抗旱耐鹽突變體

3、的研究，并對(duì)其再生植株后代的特征特性進(jìn)行了研究，旨在為創(chuàng)造花生新種質(zhì)、開拓花生新的育種途徑奠定基礎(chǔ)。主要研究?jī)?nèi)容如下：1耐鹽突變體的離體誘變及定向篩選以花生品種花育22號(hào)成熟種子胚小葉為外植體，置于添加4mg／LPYM的體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)4周，體胚誘導(dǎo)及誘變處理同時(shí)進(jìn)行。將形成體胚的外植體先后轉(zhuǎn)移到添加15g／L和20g／LNaCl的體胚萌發(fā)培養(yǎng)基中進(jìn)行定向篩選耐鹽突變體。獲得的NaCl耐性苗2011年經(jīng)嫁接移栽田間，成熟后按單株收獲

4、種子。2012年將種子按單株播種，苗期、生長(zhǎng)發(fā)育期及成熟收獲后觀察結(jié)果顯示，26個(gè)NaCI耐性再生植株后代(M2代)中，23個(gè)再生植株后代在生長(zhǎng)勢(shì)、株型、開花習(xí)性，莢果形狀、種皮顏色等方面與誘變親本不同，明顯表現(xiàn)出變異及性狀發(fā)生分離。對(duì)M2代收獲的部分種子(M3代)置于07％NaCI的鹽溶液中進(jìn)行發(fā)芽期耐鹽鑒定，參試的18個(gè)NaCl耐性再生植株的后代中，6個(gè)植株的后代發(fā)芽率極顯著高于誘變親本。利用39對(duì)引物對(duì)19個(gè)耐性再生植株的后代及誘

5、變親本進(jìn)行SSR檢測(cè)分析，均表現(xiàn)出多態(tài)性。結(jié)果表明PYM離體誘變結(jié)合NaCl定向篩選是獲得花生耐鹽突變體的有效途徑。2抗旱突變體的離體誘變及定向篩選以花生品種花育20號(hào)、花育22號(hào)扣花育25號(hào)種子胚小葉為誘變培養(yǎng)材料，以上述同樣方法進(jìn)行誘變處理。將成活形成體胚的外植體先后轉(zhuǎn)移到添加4mg／L和8mg／L羥脯氨酸(HYP)的體胚萌發(fā)培養(yǎng)基上定向篩選抗逆突變體。獲得的HYP抗性苗于2011年經(jīng)嫁接馴化后移栽田間，收獲的種子2012年種植田間

6、。觀察結(jié)果表明，大部分植株后代發(fā)生變異和分離。對(duì)M3代種子發(fā)芽期及苗期進(jìn)行干旱脅迫處理后，取葉片測(cè)定SOD活性和POD活性，結(jié)果顯示，花育20號(hào)有8個(gè)再生植株的后代，花育22號(hào)和花育25號(hào)分別有l(wèi)株的后代SOD活性和POD活性均分別顯著高于誘變親本。對(duì)18個(gè)耐HYP再生植株的后代(13個(gè)來自于花育20號(hào)、2個(gè)來自于花育22號(hào)、3個(gè)來自于花育25號(hào))進(jìn)行SSR檢測(cè)分析，驗(yàn)證植株性狀變化是否由基因突變引起。SSR檢測(cè)分析表明，與誘變親本相比