兩種泡桐耐鹽突變體的篩選及鑒定.pdf

1、泡桐是我國重要的速生豐產(chǎn)和庭院綠化樹種，在生態(tài)環(huán)境改善方面起著重要的作用，同時(shí)也是制作樂器的良好材料。泡桐在我國分布廣泛，然而土壤中的鹽濃度對(duì)泡桐分布有限制性作用。當(dāng)?shù)叵滤贿^高，Ph＞8.0，含鹽量大于0.05％則限制了泡桐在平原地區(qū)的分布。泡桐種子在發(fā)芽階段，有一定的耐鹽性，鹽漬度為1％時(shí)，其發(fā)芽率仍達(dá)到70％，當(dāng)鹽漬度達(dá)1.6-2.5％時(shí)才沒有發(fā)芽，泡桐種根及實(shí)生苗的耐鹽在0.3％左右。我國的鹽漬土壤面積約占可耕地面積的1/4，因

2、此開發(fā)鹽堿土成為人類增加耕地面積的重要研究方向。本研究通過對(duì)愈傷組織進(jìn)行誘變處理，旨在獲得能在高鹽環(huán)境中生長(zhǎng)的泡桐突變體，為鹽堿地造林提供優(yōu)良的泡桐品種，同時(shí)也為泡桐雜交育種提供具有優(yōu)良抗性基因的親本。研究結(jié)果如下：
　　 1、通過將豫雜一號(hào)泡桐愈傷組織與白花泡桐愈傷組織在不同濃度NaCl條件下培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)當(dāng)愈傷組織生長(zhǎng)環(huán)境中NaCl濃度大于0.6％時(shí)，豫雜一號(hào)泡桐愈傷組織不能生存：愈傷組織生長(zhǎng)環(huán)境中NaCl濃度大于0.8％時(shí)，白

3、花泡桐愈傷組織全部死亡。因此對(duì)豫雜一號(hào)泡桐進(jìn)行耐鹽突變體篩選的NaCl濃度為0.6％，對(duì)白花泡桐進(jìn)行耐鹽突變體篩選的NaCl濃度為0.8％。利用誘變劑MMS對(duì)泡桐愈傷組織進(jìn)行處理時(shí)，當(dāng)MMS濃度為40mg/L，處理時(shí)間為1h時(shí)，豫雜一號(hào)泡桐愈傷組織存活率為43.3％，此為對(duì)豫雜一號(hào)泡桐愈傷組織進(jìn)行誘變的半致死劑量。當(dāng)MMS濃度為80mg/L，處理時(shí)間為4h時(shí)，愈傷組織存活率最為51.7％，此為對(duì)白花泡桐愈傷組織進(jìn)行誘變的半致死劑量。

4、r>　　 2、選擇存活率接近50％的濃度時(shí)間組合為最佳誘變劑對(duì)兩種泡桐的愈傷組織進(jìn)行誘變。以MMS濃度為40mg/L，處理時(shí)間為1h的誘變劑量對(duì)豫雜一號(hào)泡桐愈傷組織進(jìn)行誘變處理，處理過的愈傷組織在NaCl濃度為0.6％的培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選，獲得分化的幼苗后將其在含致死濃度NaCl培養(yǎng)基中連續(xù)培養(yǎng)5代，共獲得16株豫雜一號(hào)泡桐耐鹽突變體；以MMS濃度為80mg/L，處理時(shí)間為4h的誘變劑量對(duì)白花泡桐愈傷組織進(jìn)行誘變處理，處理過的愈傷組織在

5、NaCl濃度為0.8％的培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選，對(duì)獲得幼苗經(jīng)過連續(xù)5代在含致死濃度NaCl培養(yǎng)基中進(jìn)行篩選，共獲得10株豫雜一號(hào)泡桐耐鹽突變體。
　　 3、利用泡桐SSR反應(yīng)體系建立時(shí)所篩選的引物對(duì)16株豫雜一號(hào)泡桐耐鹽突變體及對(duì)照進(jìn)行SSR-PCR擴(kuò)增，電泳結(jié)果顯示只有6對(duì)引物在不同植株與對(duì)照之間表現(xiàn)出多態(tài)性。對(duì)篩選出來的10株白花泡桐耐鹽植株進(jìn)行擴(kuò)增，結(jié)果顯示僅有3對(duì)引物擴(kuò)增出多態(tài)性。因此，SSR引物在豫雜一號(hào)泡桐和白花泡桐中檢測(cè)

6、出部分植株微衛(wèi)星序列發(fā)生了變異。利用NTSYS軟件對(duì)豫雜一號(hào)泡桐電泳結(jié)果進(jìn)行聚類分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同的耐鹽植株與對(duì)照之間存在遺傳距離不同，其中15號(hào)植株和第9號(hào)植株與對(duì)照之間的遺傳距離較遠(yuǎn)。
　　 4、通過對(duì)泡桐原有的DNA提取方法進(jìn)行改進(jìn)，得到了適用于泡桐AFLP分析的DNA提取方法。利用篩選出來的97對(duì)引物對(duì)豫雜一號(hào)泡桐耐鹽植株進(jìn)行了AFLP分析，結(jié)果表明，有16對(duì)引物在不同的植株中擴(kuò)增出多態(tài)性位點(diǎn)。白花泡桐AFLP結(jié)果顯示有